酶联免疫吸附实验

　　酶联免疫吸附实验即ELISA实验，其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术(包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术)中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特点。

酶联免疫吸附实验方法

　　ELISA可用于测定抗原，也可以测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：1)固相的抗原或抗体;2)酶标记的抗原或抗体;3)酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检验方法。

一、双抗体夹心法

　　双抗体夹心法，其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，然后加入含有抗原之待测样品，通过加入酶标记特异性抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。该方法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

二、竞争法

　　竞争法一般分为直接竞争法和间接竞争法，这里我们以直接竞争法为例进行原理讲解。直接竞争法，其基本原理是：将合适浓度的包被抗体包被于微孔板中，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，加入标准品(样本)和生物素标记的抗原物质进行竞争结合，经合适的温度和一定时间的孵育，洗涤后，加入HRP标记的链霉亲和素进行反应，TMB显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈负相关。该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质，当然，这种方法也可以用来检测大分子抗原物质甚至是抗体。检测大分子抗原物质时，由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有双抗体夹心法检测大分子抗原物质灵敏度高。

三、间接法测抗体

　　间接法一般用来检测抗体。其基本原理是：将一定量的抗原物包被于聚苯乙烯微孔板，加入无关蛋白载体封闭未结合位点后，加入待测样本，然后加入酶标二抗，经孵育和洗涤后，加底物显色。本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。主要用于对病原体的检测而进行传染病的诊断。

四、双抗原夹心法测抗体

　　双抗原夹心法，与双抗体夹心法类似，基本原理是将已知浓度的抗原固定于聚苯乙烯微孔板表面，对未结合位点用无关蛋白载体进行封闭后，加入待检样本，然后加入生物素标记的抗原和HRP标记的链霉亲和素，经TMB显色和终止反应，酶标仪读数之后即可计算待测物浓度。双抗原夹心法与间接法都可以对抗体进行检测。

五、捕获法测抗体

　　由于我们检测样本中的IgM含量时，其中同时含有较高浓度的IgG类抗体，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法。其基本原理是：将抗IgM抗体包被于固相微孔板，用无关蛋白载体对未结合位点进行封闭后，加入待测样本，接着加入抗原物质，然后加入针对该抗原的经生物素标记的特异性抗体和HRP标记的链霉亲和素，经TMB底物显色和终止反应后即可计算浓度。

Western blot、ELISA、免疫荧光、免疫组化的区别：

　　免疫组化或免疫荧光：检测蛋白表达，为定性实验为主，一般应用于组织居多，细胞应用较少，细胞可以使用免疫荧光实验。主要用于考察蛋白的定位、共定位等情况。

　　推荐应用：临床组织、动物组织标本的关键性蛋白检测。

　　western blot：检测蛋白表达或转录后修饰(磷酸化、剪切体、甲基化、苏素化、泛素化、乙酰化、多聚体、降解等)，与其他实验技术结合可以达到多种目的。应用最为广泛。细胞和组织都可以应用，也可以通过提取不同亚细胞组成用于检测蛋白的定位情况。为半定量实验。

　　推荐应用：细胞或组织中通路蛋白、一般蛋白的表达或转录后修饰。

　　ELISA：为定量实验，主要用于分泌型蛋白的检测居多。也可以用于动物血清、组织、细胞上清的蛋白检测。但是不适用于蛋白转录后修饰的检测，不推荐通路相关蛋白的检测。

　　推荐应用：细胞上清、组织、动物血清中分泌型蛋白，如细胞因子的检测。

　　以上是关于酶联免疫吸附实验相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。