基因编辑mrna检测

检测项目

基因编辑位点确认：通过Sanger测序或NGS确认目标位点编辑序列，覆盖率≥1000X，识别精度±1bp

编辑效率定量分析：采用ddPCR定量野生型与突变型序列比例，检测限0.1%，RSD≤5%

脱靶效应全基因组筛查：基于全基因组测序（WGS）或GUIDE-seq技术，覆盖深度30X，敏感度0.01%变异频率

mRNA完整性检测：毛细管电泳分析片段分布，DV200值≥80%，5'/3'端完整性验证

外源RNA残留检测：qPCR检测质粒DNA或体外转录模板残留，检测限≤0.01ng/μg

加帽效率测定：抗反向帽类似物（ARCA）占比分析，HPLC-UV检测，定量范围60-100%

聚腺苷酸尾长度分布：纳米孔测序测定Puly(A)尾长，分辨率±5nt，长度范围30-300nt

体外翻译活性验证：兔网织红细胞裂解物系统检测蛋白表达量，SDS-PAGE定量误差≤10%

免疫原性风险分析：ELISA检测dsRNA杂质，灵敏度1ng/mL，符合EMA指导原则

核苷酸修饰定量：LC-MS/MS检测假尿苷（Ψ）、N1-甲基假尿苷（m1Ψ）等修饰比例，定量下限0.01mul%

内毒素污染检测：鲎试剂法（LAL）测定细菌内毒素，限值≤0.1EU/μg

纳米颗粒包封率表征：Ribogreen荧光法测定游离RNA，包封率要求≥95%

检测范围

CRISPR/Cas9编辑细胞系：涵盖HEK293、Hela等工程细胞系的基因敲除/敲入验证

病毒载体包装mRNA：腺相关病毒（AAV）、慢病毒载体中装载的治疗性mRNA检测

体外转录原料质控：线性化质粒模板纯度验证，残留宿主DNA≤10ng/mg

LNPs递送制剂：脂质纳米颗粒粒径分布检测（70-150nm），PDI≤0.2

预防性疫苗原料：新冠病毒、流感病毒等mRNA疫苗序列完整性分析

肿瘤免疫治疗产品：新抗原编码mRNA的突变位点覆盖度确认

干细胞重编程因子：OSKM重编程mRNA的修饰核苷酸占比检测

基因编辑工具RNA：sgRNA/crRNA的脱靶结合活性评估

体外诊断试剂组分：CRISPR检测体系中报告RNA的功能验证

转基因生物样本：农业育种作物的编辑后代遗传稳定性分析

类器官基因治疗模型：肠道/脑类器官的局部编辑效果评估

微生物工程菌株：工业用工程菌的代谢通路改造mRNA监测

检测标准

ISO 20395:2019 分子生物学检测用核酸定量要求

ISO 23118:2021 核酸治疗产品质控指南

EP 2.6.34 欧洲药典基因治疗产品检测通则

USP<1130> 核酸治疗产品特性分析

GB/T 35892-2018 基因治疗产品质量控制要求

GB/T 37871-2019 核酸分子检测试剂盒质量评价

YY/T 1575-2017 基因测序仪通用技术要求

ICH Q5B 生物技术产品质量：遗传稳定性

FDA CMC Guidance for Human Gene Therapy INDs

EMEA/CHMP/BWP/2458 基因治疗产品开发指南

ISO 21748:2017 分子生物学测量方法验证导则

GB/T 30989-2014 高通量基因测序技术规范

检测仪器

Agilent 4200 TapeStation系统：执行mRNA完整性检测，通过电泳迁移率计算RNA完整性值（RIN）

ABI QuantStudio 7 Pro qPCR仪：完成残留DNA定量及表达水平分析，支持96通道同步检测

Thermo Q Exactive HF质谱仪：实现核苷酸修饰的精确分子量测定，质量精度<3ppm

Illumina NovaSeq 6000测序平台：进行全基因组脱靶扫描，单次运行通量6Tb

Beckman CytoFLEX流式细胞仪：评估细胞转染效率，检测灵敏度达荧光分子100个/细胞

Malvern Nano ZSP粒径分析仪：测定LNP制剂粒径分布，测量范围0.3nm-10μm

Bio-Rad QX200微滴式数字PCR系统：绝对定量编辑效率，分辨率0.001%变异频率

PerkinElmer LabChip GXII：毛细管电泳分离核酸片段，分离效率≥107塔板数/米

Waters ACQUITY UPLC H-Class系统：分析加帽效率，保留时间重现性RSD<0.5%

Nanopore PromethION 48：实时测序检测Puly(A)尾长，单孔读取速度420bp/s

检测优势

1. 确保安全：通过检测可以确保防爆用呆扳手的安全性，防止在使用过程中引发火灾或爆炸。

2. 提高质量：通过检测可以提高防爆用呆扳手的产品质量，增强其市场竞争力。

3. 延长使用寿命：通过检测可以发现呆扳手的潜在问题，及时进行维修和更换，延长其使用寿命。

4. 降低维护成本：通过定期检测可以及时发现呆扳手的问题，避免因故障导致的停机和维修成本。

5. 提高工作效率：通过检测可以确保呆扳手的正常使用，提高工作效率，减少因工具故障导致的生产损失。

　　以上是关于基因编辑mrna检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。