FastDigest CaiI检测

检测项目

FastDigest CaiI检测体系包含核心质量指标验证与功能性评估两大模块。核心质量指标验证涵盖酶活性定量分析（U/μL）、比活性测定（U/mg）及储存稳定性测试（-20℃/4℃/室温）。功能性评估重点包括：双链DNA特异性识别能力（5'-CCS↓GG-3'位点）、星号活性抑制率（≥98%）、最大反应通量（单次处理≤10μg DNA）以及混合酶体系兼容性（与FastDigest系列其他限制酶联用时的交叉抑制率）。

质量控制标准严格参照《ISO 13485医学实验室质量管理规范》，设置阳性对照（λDNA标准切割）与阴性对照（无酶反应体系）。关键判定参数包含：酶切产物电泳条带清晰度（≥3级分辨率）、非目标位点切割率（≤0.1%）、反应时间达标率（37℃条件下15分钟完成90%以上切割效率）。

检测范围

本检测方案适用于以下生物样本类型：超螺旋质粒DNA（浓度≥50ng/μL）、PCR扩增产物（长度200bp-20kbp）、基因组DNA（哺乳动物来源纯度A260/A280=1.8-2.0）及合成DNA片段（修饰碱基占比≤15%）。应用场景包括但不限于：

1. 分子克隆实验中的多克隆位点验证
2. SNP基因分型前的模板预处理
3. 病毒载体构建时的骨架序列切除
4. 宏基因组研究中的复杂样本预分级
5. 体外诊断试剂盒核心酶组分质控

特殊样本需额外预处理：甲基化DNA需进行亚硫酸氢盐转化处理；含高浓度离液盐的样本需经超滤纯化（截留分子量30kDa）；含有机溶剂的反应体系需调整甘油终浓度至≤5%。

检测方法

标准操作流程依据《分子生物学实验标准化指南》（第三版）第7章建立：

1. 样本预处理阶段：采用NanoDrop OneC测定DNA纯度（A260/A230≥2.0），Qubit 4.0进行精确定量（dsDNA HS Assay Kit）。
2. 反应体系配置：10×FastDigest Buffer 2μL, DNA模板1μg, CaiI酶1μL（5U/μL），DEPC水补至20μL。
3. 温育程序：金属浴37℃±0.5℃孵育15分钟→80℃热灭活5分钟→4℃保存。
4. 产物分析：1%琼脂糖凝胶电泳（120V×45min）结合Gel Doc XR+成像系统判读；或使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行高分辨率芯片分析（DNA 1000 Kit）。
5. 数据判读标准：完全切割产物与未处理样本迁移率差异≥15%；部分降解样本需重复测试并计算切割效率曲线。

检测仪器

实验过程涉及以下精密仪器设备：

1. Thermo Scientific Arktik Thermal Cycler：提供±0.1℃温控精度的孵育环境
2. Bio-Rad CFX96 Touch Real-Time PCR System：用于动力学监测酶切进程（SYBR Green I荧光标记法）
3. Eppendorf Centrifuge 5430 R：高速离心保障反应体系均匀性（12,000×g×30s）
4. Sartorius Cubis MSA225S-1CE-DM分析天平：精确称量缓冲液组分（d=0.01mg）
5. Mippore Milp-Q IQ7000纯水系统：制备电阻率≥18.2MΩ·cm的超纯水
6. Agilent 4200 TapeStation系统：实现自动化电泳分析与分子量定量
7. METTLER TOLEDO SevenExcellence pH计：校准缓冲液pH值至7.9±0.1
8. ESCO生物安全柜Class II A2型：保障核酸样本处理的无污染环境

所有仪器均执行年度计量校准计划，关键参数验证频率为每季度一次。温控设备需通过NIST可溯源温度探针进行多点校准（25℃/37℃/65℃/80℃），离心机转子经动平衡测试误差

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于FastDigest CaiI检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。