微生物富集培养检测

检测项目

需氧菌总数富集测定：通过非选择性营养肉汤（如TSB）在30-35℃振荡培养24-48小时，富集样品中所有需氧异养菌，为后续平板计数提供基础。培养参数：温度30±1℃，时间24h±2h，转速150rpm。

沙门氏菌选择性富集培养：采用缓冲蛋白胨水(BPW)进行预增菌（37℃, 18h），随后转种至Rappaport-Vassipadis Soy (RVS) 肉汤（42℃, 24h）和Muller-Kauffmann Tetrathionate (MKTTn) 肉汤（37℃, 24h）进行选择性增菌，显著提高沙门氏菌检出率。参数：BPW:37±1℃/18±2h; RVS:41.5±1℃/24±3h; MKTTn:37±1℃/24±3h。

单核细胞增生李斯特氏菌富集检测：使用Fraser肉汤（含萘啶酮酸、吖啶黄）进行两步富集。初级富集（FB基础液, 30℃, 24h）后，转种至Fraser完全肉汤（30℃, 48h），选择性抑制杂菌并促进目标菌生长。参数：初级：30±1℃/24±2h；二级：30±1℃/24-48h。

大肠埃希氏菌O157:H7选择性富集：采用改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)添加新生霉素（37℃, 24h），或EC肉汤添加新生霉素（44.5℃, 24h），抑制革兰氏阳性菌并促进目标菌繁殖。参数：mTSB+N:37±1℃/24±2h；EC+N:44.5±0.2℃/24±2h。

金黄色葡萄球菌增菌培养：使用含7.5%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤(TSB-S)，37℃培养24-48小时，高盐环境抑制多数非葡萄球菌生长。参数：温度37±1℃，时间24-48h。

副溶血性弧菌富集检测：采用碱性蛋白胨水(APW)，pH8.6±0.2，37℃增菌18-24小时，碱性条件利于该菌生长并抑制竞争者。参数：温度36±1℃，时间18-24h。

蜡样芽孢杆菌群选择性富集：使用甘露醇卵黄多粘菌素肉汤(MYP)，30℃培养24小时，多粘菌素抑制G-菌，目标菌分解甘露醇产酸指示变色。参数：30±1℃/24±2h。

霉菌和酵母菌富集培养：采用含氯霉素的马铃薯葡萄糖肉汤(PDB)，pH5.6±0.2，25-28℃培养5-7天，抗生素抑制细菌生长。参数：温度25-28℃，时间5-7d。

厌氧梭菌（如产气荚膜梭菌）增菌：接种于强化梭菌培养基(RCM)或硫乙醇酸盐流体培养基(FTM)，置于厌氧罐（85% N2, 10% H2, 5% CO2），37℃培养24-72小时。参数：厌氧环境，37±1℃，时间24-72h。

阪崎克罗诺杆菌（坂崎肠杆菌）富集：使用脑心浸出液肉汤(BHI)，36℃预增菌3-6小时，随后转种至改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-mLST（含万古霉素）44℃±0.5℃培养24小时进行选择性增菌。参数：BHI:36±1℃/3-6h; mLST+V:44±0.5℃/24±2h。

检测范围

加工食品及原料：各类肉制品、乳制品、蛋制品、水产品、果蔬制品、谷物、调味品、即食食品等，检测潜在致病菌（沙门氏菌、单增李斯特菌等）污染及指示菌水平。

瓶装饮用水及饮料：监测铜绿假单胞菌、产气荚膜梭菌等特定指示菌或致病微生物的存在，评估水源及生产环节卫生状况。

药品及原料药：依据药典要求，对无菌产品、非无菌产品进行需氧菌、厌氧菌、霉菌和酵母菌的富集检测，评估微生物负载及控制无菌保障。

医疗器械：对植入物、导管、体外诊断试剂、一次性卫生用品等进行初始污染菌（TAMC/TYMC）富集及特定致病菌（如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）筛查。

化妆品及个人护理用品：检测防腐挑战失败风险、评估产品中耐防腐剂的特定微生物（如洋葱伯克霍尔德菌），以及致病菌（如铜绿假单胞菌、白色念珠菌）污染。

环境监测样本：食品加工厂、洁净室（制药/GMP）、医院环境的表面涂抹样、空气沉降样、水样（纯化水、注射用水）中的特定微生物监控与富集。

饲料及宠物食品：筛查沙门氏菌、沙门氏菌亚种、产气荚膜梭菌等动物病原体及人畜共患病原体。

临床及生物样本：富集培养难以分离的病原体（如布鲁氏菌、军团菌）或低载量样本中的目标微生物，提高临床检出率。

生物肥料及土壤改良剂：评估产品中有效功能微生物（如固氮菌、解磷菌）的活性及特定病原菌（如大肠杆菌O157:H7）的风险。

科研材料及细胞培养基质：检测胎牛血清、培养基、胰酶等生物制品中支原体、病毒或特定细菌的潜伏污染。

检测标准

GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验（含BPW, RVS, MKTTn, SC等富集步骤）

GB 4789.30-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验（采用Fraser肉汤二级富集）

ISO 6579-1:2017 Microbiulogy of the food chain — Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping of Salmonella — Part 1: Detection of Salmonella spp.（规定MSRV半固体选择增菌等）

ISO 11290-1:2017 Microbiulogy of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria monocytogenes and of Listeria spp. — Part 1: Detection method（使用Half Fraser/Fraser富集）

GB 4789.38-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数（含EC肉汤或LST肉汤发酵管增菌步骤）

USP <61> Microbiulogical Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests & USP <62> Microbiulogical Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms（规定了药品中多种微生物的预增菌/选择增菌方法）

ASTM D5246-19 Standard Practice for Isulation and Enumeration of Pseudomonas aeruginosa from Water（使用APT肉汤富集）

EP 2.6.12 Microbiulogical examination of non-sterile products: Microbial enumeration tests & EP 2.6.13 Microbiulogical examination of non-sterile products: Test for specified microorganisms（欧洲药典微生物检测通则）

GB/T 13093-2006 饲料中细菌总数的测定（含营养肉汤培养步骤）

SN/T 1870-2016 出口食品中食源性致病菌检测方法 实时荧光PCR法（包含各类致病菌的前增菌富集步骤）

检测仪器

恒温振荡培养箱：提供精确的温度控制（±0.5℃）及振荡功能（转速范围0-300rpm），保证增菌液均匀传质与充分氧气供应，加速目标微生物增殖。型号参数示例：温度范围4-70℃，容量≥150L，振荡振幅25mm。

生物安全柜（II级A2/B2型）：为处理潜在致病性微生物提供人员、产品及环境的三重保护，确保富集操作在无菌、无交叉污染的物理屏障内进行。气流参数：进气流速≥0.5m/s，下降流速0.25-0.5m/s，HEPA过滤效率＞99.99% @ 0.3μm。

厌氧培养系统（含厌氧罐/工作站）：通过自动气体置换装置（如真空-混合气反复置换）或连续气流密封腔体，精确维持厌氧环境（O2浓度＜1ppm，典型气体比例85% N2, 10% H2, 5% CO2），满足严格厌氧菌（如梭菌）的增殖需求。工作站参数示例：O2控制范围0-20%，湿度可控。

微生物比浊仪/麦氏比浊仪：通过测定富集培养液在特定波长（如600nm）下的吸光度(OD值)，非破坏性地实时监测微生物生长密度与增殖曲线，精确判定增菌终点。量程：0-10 McFarland或对应OD值（如600nm下0-3.0 OD）。

自动移液工作站：高精度（CV＜1%）完成增菌培养过程中的大体积接种、连续稀释、样品转移等标准化操作，减少人为误差并提高通量。参数：移液范围1μL-1000μL，96/384通道配置。

全自动微生物快速培养检测系统：集成恒温、振荡、光学检测（如色度、浊度、荧光）功能，可对增菌过程进行实时、连续、多参数监测，自动判定阳性结果（如代谢产气导致压力变化、靶标酶促反应产荧光）。检测通道数≥32。

高通量恒温培养箱（带CO2控制）：适用于大批量增菌管/瓶的静态培养，可精确控制温度（±0.1℃）及CO2浓度（如5±0.2%），满足特定微生物（如弯曲菌）的富集环境要求。容积≥500L，CO2控制范围0-20%。

水浴摇床：提供高精度控温（如水浴介质，精度±0.1℃）及振荡，特别适用于要求严格、稳定高温的增菌步骤（如大肠杆菌O157:H7在44.5℃下的选择性增菌）。温度范围：室温-100℃，振荡频率30-400rpm。

荧光定量PCR仪：用于富集后目标微生物的特异性快速鉴定与定量。其功能依赖于富集培养获得的足够模板量，以克服抑制剂影响并达到可靠检出限。检测通道：常见4-6通道，支持多重检测。

全自动微生物接种仪：将富集后的培养液自动划线接种到选择性/鉴别性琼脂平板，实现高效、标准化分离，消除手工操作差异。接种模式：四区划线、涂布、L棒涂抹等，容量≥40皿/批次。

检测优势

1. 确保安全：通过检测可以确保防爆用呆扳手的安全性，防止在使用过程中引发火灾或爆炸。

2. 提高质量：通过检测可以提高防爆用呆扳手的产品质量，增强其市场竞争力。

3. 延长使用寿命：通过检测可以发现呆扳手的潜在问题，及时进行维修和更换，延长其使用寿命。

4. 降低维护成本：通过定期检测可以及时发现呆扳手的问题，避免因故障导致的停机和维修成本。

5. 提高工作效率：通过检测可以确保呆扳手的正常使用，提高工作效率，减少因工具故障导致的生产损失。

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