植物病毒检测

检测项目

双链RNA检测：测定病毒复制中间体浓度，灵敏度达0.1pg/μl，使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离

ELISA血清学检测：定量分析外壳蛋白抗原，检测限5ng/mL，包被抗体浓度1μg/well

RT-PCR扩增：靶向保守基因区域，引物长度18-22bp，退火温度梯度52-58℃，循环数35±2

实时荧光定量PCR：SYBR Green法检测Ct值，熔解曲线分析温度范围60-95℃，扩增效率要求90-110%

核酸斑点杂交：使用地高辛标记探针，膜转移缓冲液20×SSC，显色灵敏度达100fg

电子显微镜观察：负染法分辨率2nm，超薄切片厚度70nm，可识别20-800nm病毒颗粒

生物测定：指示植物接种后观察期21天，病症分级标准0-4级

宏基因组测序：Illumina平台PE150模式，数据量≥10Gb，contig组装最小长度200bp

衣壳蛋白电泳：SDS-PAGE梯度胶8-15%，考马斯亮蓝R250染色

载体昆虫传毒试验：蚜虫单虫饲毒时间48h，接毒株隔离培养周期30天

种子带毒率检测：随机取样500粒，萌发温度25±1℃，幼苗检测窗口期14d

病毒粒子稳定性：测定温度系数（Q10）1.5-3.0，稀释限点10⁻³-10⁻⁶

检测范围

粮食作物种苗：水稻条纹叶枯病毒、小麦黄花叶病毒等谷类病原筛查

蔬菜嫁接苗：瓜类褪绿黄化病毒、番茄斑萎病毒等设施农业病原监测

果树无性繁殖材料：柑橘衰退病毒、苹果茎沟病毒等木本病毒检疫

花卉组培苗：兰花环斑病毒、百合潜隐病毒等观赏植物健康认证

中药材原料：菊花B病毒、三七病毒病等药用植物病原鉴定

进口植物繁殖体：执行ISPM31标准检疫，涵盖200+种检疫性病毒

昆虫媒介监测：蚜虫/粉虱/蓟马等介体带毒率检测，单虫核酸提取量≥50ng

土壤根际样本：烟草花叶病毒等土传病毒存活周期评估

种子健康认证：国际种子联盟ISTA规则下的7天发芽检测法

转基因材料：外源启动子区域病毒同源序列筛查

组培污染溯源：培养物中病毒交叉污染点排查

生态保护区：野生植物病毒本底调查，网格化采样密度5×5km

检测标准

ISO 16140-3:2021 分子检测方法验证规范

GB/T 28068-2011 柑桔病毒类病害检测规程

EPPO PM 7/113 病毒诊断标准操作程序

GB/T 35343-2017 水稻病毒检测技术规范

ISPM 31 繁殖材料国际标准

ASTM E1875-13 核酸提取纯度评估标准

NY/T 2286-2016 蔬菜病毒分子检测指南

OIE Terrestrial Manual 2023植物病毒章节

GB/T 36851-2018 植物检疫病毒PCR检测通则

SN/T 2127-2022 进出境种苗病毒检疫规程

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：ABI QuantStudio 5，支持TaqMan探针多重检测，温控精度±0.1℃

全自动核酸提取系统：KingFisher Flex，磁珠法通量96样本/次，交叉污染率＜0.1%

脉冲电泳仪：CHEF-DR III，分离范围10kb-10Mb，电场角度120°切换

冷冻超速离心机：Optima XPN-100，最大转速100,000rpm，病毒粒子沉降系数分析

透射电子显微镜：HT7800，点分辨率0.2nm，配备低温样品台病毒形态观测

全自动酶标仪：SpectraMax i3x，检测波长范围190-1000nm，支持四通道同步扫描

微量紫外分光光度计：NanoDrop One，样品量0.5-2μl，核酸纯度OD260/280≥1.8

激光共聚焦显微镜：LSM 900，Z轴分辨率0.3μm，病毒侵染过程原位观察

高通量测序平台：Illumina NovaSeq 6000，单次运行输出6Tb数据，病毒基因组组装

生物分子互作仪：Biacore 8K，检测限1RU，病毒衣壳蛋白亲和力分析

检测优势

1. 确保安全：通过检测可以确保防爆用呆扳手的安全性，防止在使用过程中引发火灾或爆炸。

2. 提高质量：通过检测可以提高防爆用呆扳手的产品质量，增强其市场竞争力。

3. 延长使用寿命：通过检测可以发现呆扳手的潜在问题，及时进行维修和更换，延长其使用寿命。

4. 降低维护成本：通过定期检测可以及时发现呆扳手的问题，避免因故障导致的停机和维修成本。

5. 提高工作效率：通过检测可以确保呆扳手的正常使用，提高工作效率，减少因工具故障导致的生产损失。

　　以上是关于植物病毒检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。