肠道病毒71型检测

检测项目

病毒分离培养：采用RD细胞系进行病毒增殖，培养周期5-7天，阳性判定标准为典型CPE病变≥75%

血清中和试验：测定中和抗体效价，使用100TCID50病毒量，结果判定标准为抑制≥50%细胞病变

实时荧光RT-PCR：检测EV71特异性RNA，灵敏度达10拷贝/μL，采用VP1区引物：5'-GCAGCCCAAAAGAACTTCAC-3'

ELISA检测IgM抗体：使用预包被VP1抗原，OD450nm临界值=阴性均值×2.1，检测窗口期3-5天

免疫荧光检测：采用FITC标记单克隆抗体，阳性判定标准为胞浆内特异性荧光≥++

基因测序分型：全基因组测序覆盖度≥98%，用于C4a亚型鉴定，序列比对使用BLASTn

病毒载量测定：qPCR标准曲线R²≥0.99，动态范围10^1-10^8拷贝/mL

交叉中和试验：评估疫苗免疫血清对其他肠道病毒的中和能力，病毒包括CA16、PV等

热稳定性测试：56℃水浴处理30分钟，检测病毒存活率，合格标准为残留感染性≤0.5%

空斑形成试验：甲基纤维素覆盖培养，空斑计数误差≤15%，用于病毒滴度测定

衣壳蛋白表达分析：Western Blot检测VP0/VP2蛋白，使用12%分离胶，ECL显影时间≤3min

细胞嗜性研究：同步感染Vero/Hep-2细胞系，TCID50差异分析p≤0.05

检测范围

临床咽拭子样本：采集专用病毒采样管，保存温度-70℃，运输时限≤48小时

脑脊液标本：急性期采集量≥1mL，检测特异性IgM抗体

血清抗体监测：包括恢复期血清配对检测，采样间隔14-21天

灭活疫苗原液：半成品检定项目含无菌试验、异常毒性检查

疫苗成品效力试验：采用小鼠中和抗体模型，ED50测定要求95%CI可信限

环境物表监测：包括幼儿园玩具、餐具等，采样面积10cm×10cm

污水样本检测：富集方法采用PEG6000沉淀，检测限≤500拷贝/L

实验动物标本：乳鼠脑组织病理学检查，固定用10%中性福尔马林

细胞基质检定：生产用Vero细胞库外源病毒检查

诊断试剂盒验证：包括国家参考品符合性测试

生物安全柜监测：操作台面病毒残留检测，采样点≥5个位点

胎盘球蛋白制品：静脉注射用人免疫球蛋白抗EV71效价测定

检测标准

ISO/TS 15216-2:2013 食品中病毒检测方法

GB/T 40982-2021 手足口病诊断标准

WHO Manual for the Laboratory Diagnosis of Enterovirus

ChP2020 人用疫苗总论 生物制品病毒外源因子检查

GB 17013-1997 感染性腹泻诊断标准及处理原则

ISO 15189:2012 医学实验室质量和能力要求

WS 296-2017 手足口病预防控制指南

EP9.0 欧洲药典病毒安全性章节2.6.16

GB/T 37871-2019 核酸检测试剂盒质量评价通则

YY/T 1595-2017 手足口病抗体检测试剂盒

ISO 22174:2005 食物链微生物学PCR检测通用要求

GB/T 34796-2017 单克隆抗体产品病毒检测

检测仪器

实时荧光PCR仪：ABI QuantStudio5，配备FAM/HEX双通道，支持TaqMan探针法检测病毒RNA

生物安全柜：Class II A2型，气流速度0.45±0.025m/s，用于病毒分离操作

倒置显微镜：Olympus IX73，配备10×/20×相衬物镜，观察细胞病变效应

酶标仪：BioTek Synergy H1，检测波长450nm/630nm，用于ELISA结果判读

病毒超速离心机：Beckman Optima XPN，最大转速100,000rpm，浓缩环境样本中病毒颗粒

自动核酸提取仪：MagCore HF16，磁珠法提取效率≥95%，处理通量96样本/批次

冷冻切片机：Leica CM1950，制作脑组织病理切片，厚度设定5μm

电泳系统：Bio-Rad PowerPac Basic，电压范围10-300V，用于病毒蛋白分离

凝胶成像仪：Tanon 4600SF，1600万像素CCD，检测Western Blot条带

恒温培养箱：Thermo Forma 311，温度控制±0.5℃，CO2浓度5±0.2%

液氮储存罐：Chart MVE XC47/11，保存病毒毒种，气相温度≤-150℃

流式细胞仪：BD FACSCelesta，检测荧光微球抗体反应，采集速率10,000细胞/秒

检测优势

1. 确保安全：通过检测可以确保防爆用呆扳手的安全性，防止在使用过程中引发火灾或爆炸。

2. 提高质量：通过检测可以提高防爆用呆扳手的产品质量，增强其市场竞争力。

3. 延长使用寿命：通过检测可以发现呆扳手的潜在问题，及时进行维修和更换，延长其使用寿命。

4. 降低维护成本：通过定期检测可以及时发现呆扳手的问题，避免因故障导致的停机和维修成本。

5. 提高工作效率：通过检测可以确保呆扳手的正常使用，提高工作效率，减少因工具故障导致的生产损失。

　　以上是关于肠道病毒71型检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。