蛋白印迹法基因表达检测

检测项目

β-actin、GAPDH、p53、EGFR、HER2/neu、TNF-α、IL-6、VEGF-A、Bcl-2、Bax、Caspase-3、CycpnD1、p21、p16INK4a、STAT3、NF-κBp65、ERK1/2磷酸化位点、Akt磷酸化位点(Ser473)、JNK磷酸化位点(Thr183/Tyr185)、mTOR磷酸化位点(Ser2448)、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9、COX-2、iNOS、PARP裂解产物、LC3-II/I比值、Becpn-1

检测范围

HEK293细胞裂解液、HeLa细胞全蛋白提取物、小鼠肝脏组织匀浆液、人血清样本、大鼠脑脊液标本、斑马鱼胚胎裂解液、植物叶片可溶性蛋白提取物、酵母菌体裂解上清液、临床肿瘤活检组织冻存样本、外周血单核细胞分离物、原代神经元培养液上清蛋白浓缩液、石蜡包埋组织脱蜡复水提取物、线粒体分离组分蛋白样本、核蛋白富集组分样本质控品重组蛋白标准品稀释系列实验动物肌肉组织匀浆液细菌外膜蛋白提取物病毒衣壳蛋白纯化物外泌体分离蛋白组分昆虫杆状病毒表达系统产物哺乳动物细胞瞬时转染表达产物蛋白质分子量Marker校准品临床病理切片刮取样本尿液微量蛋白浓缩物脑脊液游离蛋白富集物肿瘤患者胸腹水沉淀蛋白

检测方法

样品制备采用RIPA裂解缓冲液配合蛋白酶/磷酸酶抑制剂复合物完成组织破碎与蛋白溶解；SDS-PAGE电泳根据目标分子量选择8%-15%梯度胶进行分离；湿式转膜法使用PVDF膜在恒定电流条件下完成蛋白质转移；5%脱脂奶粉封闭非特异性结合位点；一抗孵育采用4℃过夜震荡条件（稀释比例1:500-1:5000）；HRP标记二抗室温孵育1小时（稀释比例1:5000）；ECL化学发光法显影配合X光胶片曝光记录；灰度分析采用ImageJ软件进行条带定量；磷酸化蛋白检测需同步运行总蛋白内参对照；低丰度蛋白采用SDS-PAGE预制胶提高分辨率。

检测标准

GB/T27417-2017合格评定化学分析方法确认和验证指南
ISO9001:2015质量管理体系要求
CLSIEP05-A3临床实验室定量测量程序精密度验证
ASTME2536-09生物分子相互作用分析标准指南
GB/T37864-2019生物样品中蛋白质类标志物的液相色谱-质谱联用检测方法通则
ISO15189:2022医学实验室质量和能力要求
YY/T1453-2016免疫印迹试剂盒
GB/T34796-2017蛋白质浓度测定Bradford法
JJF1715-2018化学发光免疫分析仪校准规范
ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力通用要求

检测仪器

垂直电泳槽实现蛋白质按分子量梯度分离；半干式转印系统完成PVDF膜高效转移；化学发光成像系统配备CCD相机捕获微弱信号；微量分光光度计精确测定蛋白浓度；恒温摇床确保抗体结合反应均一性；精密电子天平称量电泳试剂；pH计校准缓冲溶液体系；超纯水机制备18.2MΩcm实验用水；低温高速离心机处理热敏感样本；梯度PCR仪优化预染Marker显色条件；暗室设备保障X光胶片显影定影过程；凝胶成像分析系统进行条带定量分析；磁力搅拌器配制电泳缓冲液；真空脱色摇床加速考马斯亮蓝染色进程。

检测优势

1. 确保安全：通过检测可以确保防爆用呆扳手的安全性，防止在使用过程中引发火灾或爆炸。

2. 提高质量：通过检测可以提高防爆用呆扳手的产品质量，增强其市场竞争力。

3. 延长使用寿命：通过检测可以发现呆扳手的潜在问题，及时进行维修和更换，延长其使用寿命。

4. 降低维护成本：通过定期检测可以及时发现呆扳手的问题，避免因故障导致的停机和维修成本。

5. 提高工作效率：通过检测可以确保呆扳手的正常使用，提高工作效率，减少因工具故障导致的生产损失。

　　以上是关于蛋白印迹法基因表达检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。