细胞核酸定量检测

检测项目

总DNA浓度与纯度检测：测定样本中所有DNA分子的总浓度，并通过A260/A280等吸光度比值评估其蛋白质、盐离子等杂质污染程度。

总RNA浓度与纯度检测：测定样本中所有RNA（包括rRNA、mRNA、tRNA等）的总浓度，并通过A260/A230等比值评估盐类或有机溶剂的残留。

双链DNA（dsDNA）定量：使用荧光染料特异性结合双链DNA进行高灵敏度、高特异性的定量，排除单链核酸干扰。

信使RNA（mRNA）完整性分析：通过电泳或芯片等方法评估mRNA的降解情况，常用指标为RNA完整性系数（RIN）。

特定基因拷贝数变异（CNV）分析：检测基因组中特定基因或片段的拷贝数相对于参考基因组的增加或缺失。

线粒体DNA（mtDNA）定量：测定细胞中线粒体基因组的拷贝数，常用于代谢研究、衰老及某些疾病的相关分析。

循环肿瘤DNA（ctDNA）定量：对血液等体液中来自肿瘤细胞的游离DNA进行定量，用于液体活检和肿瘤监测。

病毒载量检测：定量测定患者样本中特定病毒（如HIV、HJianCe、HCV）的基因组核酸数量，指导抗病毒治疗。

基因表达水平（mRNA丰度）定量：测量特定基因转录产生的mRNA分子数量，以研究基因的功能与调控。

微生物16S rRNA基因定量：通过对保守的16S rRNA基因进行定量，来评估环境或宿主样本中细菌的总负荷或特定菌群的丰度。

检测范围

基础分子生物学研究：用于基因克隆、测序文库构建、PCR扩增等实验前的核酸质量控制和标准化。

临床疾病诊断与筛查：应用于遗传病诊断、产前筛查、传染病病原体检测及肿瘤的早期诊断与分型。

药物研发与药效评估：在药物靶点发现、基因治疗载体定量、以及药物对基因表达影响的研究中至关重要。

法医学与亲子鉴定：对微量DNA样本进行定量，确保后续STR分型等法医遗传学分析的可靠性。

农业与转基因检测：用于转基因作物中外源基因拷贝数的确定以及作物病原体的检测。

环境微生物监测：定量分析土壤、水体等环境样本中的微生物群落结构与丰度变化。

食品安全检测：检测食品中致病微生物（如沙门氏菌、大肠杆菌）的核酸含量，以及动物源性成分的鉴别。

干细胞与再生医学研究：在干细胞培养与分化过程中，监测多能性基因或分化标志物基因的表达动态。

血液筛查与安全：对献血者血液进行病原体核酸筛查，大幅缩短“窗口期”，提升用血安全。

肿瘤预后与疗效监测：通过动态监测ctDNA或特定融合基因的拷贝数变化，评估肿瘤复发风险和治疗反应。

检测方法

紫外分光光度法：基于核酸在260nm波长处有最大吸收峰的原理，快速估算核酸浓度并判断纯度，但无法区分DNA和RNA。

荧光染料法：使用PicoGreen、RiboGreen等荧光染料特异性结合核酸，通过荧光强度定量，灵敏度远高于紫外法。

实时荧光定量PCR（qPCR）：在PCR扩增过程中通过荧光信号实时监测产物量，实现对起始模板的绝对或相对定量，应用最广泛。

数字PCR（dPCR）：将样本分割成数万个微反应单元进行独立PCR，通过计数阳性孔数实现绝对定量，无需标准曲线，精度极高。

微滴式数字PCR（ddPCR）: 数字PCR的一种主流技术，利用油包水微滴生成技术分割样本，特别适合低丰度靶标和复杂背景下的检测。