荧光原位杂交实验

检测项目

基因扩增检测：通过特异性探针检测目标基因的拷贝数是否异常增加，常用于HER2、MYC等癌基因的评估。

基因缺失检测：用于识别特定基因或染色体区域的丢失，如1p/19q联合缺失是少突胶质细胞瘤的重要诊断标志。

染色体易位检测：利用双色或多色融合探针，可视化染色体之间的异常连接，如BCR-ABL融合基因检测。

染色体数目异常（非整倍体）检测：使用着丝粒探针快速计数特定染色体的数目，用于产前诊断或肿瘤研究。

微缺失综合征检测：针对染色体微小片段的缺失进行高分辨率检测，如迪乔治综合征（22q11.2缺失）。

病毒基因组整合检测：探测病毒DNA（如HPV、EJianCe）是否整合到宿主细胞基因组中。

端粒长度评估：使用端粒特异性重复序列探针，间接评估细胞端粒的长度变化。

基因断裂检测：当易位伴侣基因未知时，使用断裂分离探针判断目标基因是否发生断裂。

全染色体涂抹分析：使用全染色体涂抹探针进行核型分析，识别复杂染色体重排。

mRNA表达定位：使用针对mRNA设计的寡核苷酸探针，在细胞原位检测特定基因的表达位置和水平。

检测范围

实体肿瘤组织切片：对石蜡包埋或冷冻的组织切片进行FISH分析，用于肿瘤分型、预后判断和靶向治疗指导。

血液或骨髓涂片：直接对血细胞或骨髓细胞进行间期FISH分析，用于白血病、淋巴瘤的遗传学诊断和微小残留病灶监测。

羊水细胞：对产前羊膜腔穿刺获得的胎儿脱落细胞进行快速非整倍体筛查（如13、18、21、X、Y染色体）。

绒毛膜细胞：在孕早期通过绒毛取样获取细胞，进行胎儿染色体异常的早期诊断。

尿路上皮细胞：利用尿液中的脱落细胞进行FISH检测，辅助膀胱癌的诊断和术后监测。

宫颈脱落细胞：在宫颈癌筛查中，检测高危型HPV的DNA整合状态或特定基因的异常。

植物染色体：应用于植物基因组学研究，如基因定位、染色体识别和进化分析。

微生物鉴定：使用种属特异性rRNA探针，在环境或临床样本中原位鉴定和计数微生物。

循环肿瘤细胞：对外周血中稀有的循环肿瘤细胞进行FISH分析，实现无创的肿瘤基因分型。

石蜡组织芯片：在高通量组织芯片上进行FISH，可同时分析大量样本的特定遗传改变。

检测方法

样本制备与固定：根据样本类型（组织、细胞）进行切片、涂片或滴片，并使用甲醇/冰醋酸或甲醛进行固定以保持形态和核酸完整性。

预处理与通透：对石蜡切片进行脱蜡、水化，并使用蛋白酶K等试剂消化蛋白，增加细胞膜和核膜的通透性以便探针进入。

探针变性：将含有目标序列的DNA探针与杂交液混合，加热至73-75℃，使双链DNA探针解链成为单链。

靶DNA变性：将制备好的样本在70-75℃的甲酰胺变性液中处理，使细胞内的靶DNA双链解开为单链状态。

杂交：将变性后的探针混合物滴加到变性后的样本上，加盖玻片密封，置于湿盒中37-42℃孵育过夜，使探针与互补靶序列退火结合。

洗脱：使用不同严格度的SSC缓冲液洗去未杂交及非特异性结合的探针，降低背景信号。

复染与封片：使用DAPI等荧光染料对细胞核进行复染以显示形态，然后使用抗淬灭封片剂封片。

荧光显微镜观察：在配备特定滤光片组的荧光显微镜下观察不同荧光信号（如FITC、TRITC、Cy5）的位置、数量和模式。

信号分析与判读：由经验丰富的技术人员或通过图像分析软件计数和分析荧光信号，根据预设标准做出诊断或研究结论。

图像采集与存档：使用高分辨率的CCD相机拍摄数字图像，并进行归档保存以供后续复查或发表使用。

检测仪器设备

荧光显微镜：核心观察设备，配备汞灯或LED光源，以及针对不同荧光染料（如DAPI、FITC、Texas Red、Cy5）的专用滤光片组。

杂交仪/湿盒：提供恒温、密闭湿润环境的设备，确保杂交过程温度准确且样本不会干燥。

原位杂交专用烘片机/烤片机：用于组织切片的烘烤，使其牢固附着于载玻片，并可用于变性和杂交后的玻片干燥。

水浴锅或PCR仪：用于控制探针和样本DNA的变性温度，通常需要温度精度在±1℃以内。

脱色摇床

高压蒸汽灭菌锅或电热板：用于实验所用玻璃器皿、试剂和水的灭菌处理，以及某些预处理步骤的加热。