腺苷二磷酸核糖流式细胞术检测

检测项目

总PARylation水平：检测细胞内所有蛋白质上ADP-核糖聚合物（PAR）的总体修饰水平，反映PARP酶的全局活性。

PARP1自身修饰：特异性检测PARP1酶在激活后发生的自身PARylation修饰，是DNA损伤响应的关键指标。

组蛋白PARylation：检测核心组蛋白（如H1， H2B）上的PAR修饰，与染色质结构重塑和DNA修复相关。

特定靶蛋白PARylation：利用目标蛋白抗体与PAR抗体进行共染色，分析特定信号蛋白或修复因子上的PAR修饰。

单/多聚ADP-核糖比例：通过使用识别不同链长ADP-核糖的抗体，初步区分单ADPR修饰与多聚PAR链修饰。

细胞周期依赖性PARylation：结合DNA染料（如PI），分析不同细胞周期时相（G1， S， G2/M期）细胞内PAR修饰的动态变化。

凋亡细胞中的PARylation：与Annexin V等凋亡标记联用，研究细胞凋亡过程中PARP1切割及PAR信号的变化。

免疫细胞亚群PARylation分析：结合CD3， CD4， CD8等表面标记，分析T细胞、B细胞等特定免疫细胞亚群内的PAR水平。

PARP抑制剂药效评估：检测经PARP抑制剂处理后，细胞内PAR信号被抑制的效率，用于药物敏感性测试。

DNA损伤诱导的PAR爆发：测量经辐照或化疗药物（如H2O2， 喜树碱）处理后，细胞内快速且短暂的PAR信号增强。

检测范围

肿瘤学研究：用于评估肿瘤细胞对PARP抑制剂的敏感性，研究同源重组修复缺陷（HRD）细胞的合成致死效应。

DNA损伤与修复机制：广泛应用于研究各种DNA损伤剂（辐射、化学物）触发的DNA损伤应答（DDR）通路激活。

免疫细胞功能研究：分析T细胞活化、巨噬细胞极化等免疫过程中PARylation修饰的调节作用。

神经退行性疾病：研究在氧化应激下，神经元中过度PARylation与细胞死亡（parthanatos）的关系。

炎症与感染性疾病：探索病原体感染或炎症因子刺激下，免疫细胞内PARP激活及其在炎症反应中的角色。

心血管疾病研究：应用于心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化等模型中，研究PARP1激活与细胞能量耗竭的关系。

干细胞生物学：用于分析多能干细胞分化、重编程过程中表观遗传修饰（如PARylation）的动态变化。

药物筛选与开发：作为高通量筛选平台的关键读值，用于发现和优化新型PARP抑制剂或其他调节剂。

基础信号转导研究：探究PARylation作为可逆的蛋白质翻译后修饰，在多种细胞信号通路中的调控功能。

临床样本检测：适用于外周血单个核细胞（PBMC）、骨髓穿刺液、实体瘤消化后的单细胞悬液等临床样本的分析。

检测方法

细胞培养与处理：培养目标细胞，根据实验设计使用DNA损伤剂、PARP抑制剂或其它刺激物进行处理。

细胞固定与透化：使用多聚甲醛等固定剂固定细胞，随后用温和的去垢剂（如Triton X-100）透化细胞膜，使抗体能进入胞内。

抗体孵育（一抗）：加入识别PAR或特定ADP-核糖修饰的特异性小鼠或兔源单克隆/多克隆一抗，于4°C孵育过夜或室温孵育1-2小时。

洗涤步骤：用含BSA或血清的PBS缓冲液充分洗涤细胞，去除未结合的一抗，降低背景信号。

抗体孵育（二抗）：加入荧光素（如FITC， PE， Alexa Fluor系列）标记的种属特异性二抗，避光室温孵育30-60分钟。

多色标记组合：若需多参数分析，可同时加入针对其他靶点（如表面标志物、磷酸化蛋白）的抗体进行共染色。

DNA染色：可选步骤，加入碘化丙啶（PI）、7-AAD或DAPI等核酸染料，用于区分死活细胞和进行细胞周期分析。

流式上机前准备：用PBS重悬细胞，通过滤网制成单细胞悬液，转移至流式管中，尽快上机检测。