体外模拟代谢稳定性测试

检测项目

固有清除率测定：评估化合物在肝微粒体或肝细胞等生物系统中，不受膜通透性和蛋白结合影响的固有代谢速率。

半衰期计算：通过测定化合物浓度随时间的变化，计算其代谢掉一半所需的时间，是评价稳定性的核心参数。

代谢产物鉴定：利用高分辨质谱等技术，分析并鉴定化合物在代谢过程中生成的主要和次要代谢产物结构。

酶动力学参数测定：包括米氏常数和最大反应速率等，用于量化代谢酶对底物的亲和力和催化效率。

CYP450酶亚型贡献度：确定细胞色素P450家族中不同亚型对化合物代谢的相对贡献，预测潜在的药物-药物相互作用。

血浆稳定性测试：评估化合物在血浆中是否会被酯酶、蛋白酶等水解或降解，反映其在循环系统中的稳定性。

肝细胞稳定性测试：使用原代肝细胞或肝细胞系，在更接近生理环境的完整细胞系统中评估化合物的代谢命运。

微粒体稳定性测试：使用肝微粒体作为代谢酶来源，是评估I相代谢反应最常用和标准化的体外模型。

S9组分稳定性测试：使用肝S9组分，其同时含有微粒体和胞液酶，可同时评估I相和II相代谢反应。

重组酶稳定性测试：使用单一的重组人源代谢酶，研究特定酶对化合物的代谢作用。

检测范围

小分子化学创新药：新化学实体在临床前开发阶段必须进行的核心药代动力学评价之一。

候选化合物筛选：在药物发现早期，对大量化合物库进行高通量筛选，快速淘汰代谢不稳定的分子。

天然产物活性成分：评估从中草药或天然来源中提取的活性成分在体内的潜在代谢行为。

前药设计评价：验证设计的前药能否在目标部位被有效代谢转化为活性母药。

手性药物对映体：分别评估手性药物的不同对映体在代谢上的差异，即立体选择性代谢。

药物-药物相互作用评估：作为底物、抑制剂或诱导剂，研究新药与已上市药物合用时可能发生的代谢相互作用。

中药复方研究：探究复杂中药复方中主要成分的代谢特性，为阐释其药效物质基础提供依据。

农药与化学品安全评估：在毒理学研究中，评估外源性化学物质在生物体内的代谢活化或解毒过程。

化妆品功效成分：评估某些经皮吸收后可能进入体循环的化妆品成分的代谢稳定性。

食品添加剂与营养素：研究食品添加剂、功能性营养素在胃肠道及肝脏中的代谢转化情况。

检测方法

孵育法：将测试化合物与代谢系统在适宜缓冲液中共同孵育，定时取样，是最基础的核心方法。

底物 depletion 法：通过监测孵育体系中母药化合物随时间的减少速率来直接计算固有清除率。

代谢产物生成法：通过定量分析特定代谢产物的生成速率来间接反映代谢活性，适用于有明确代谢路径的化合物。

Cocktail探针底物法：将多种CYP酶的特异性探针底物与受试化合物共同孵育，可一次性评估对多个CYP亚型的抑制潜力。

LC-MS/MS定量分析：使用液相色谱-串联质谱技术对孵育样品中的母药或代谢产物进行高灵敏度、高选择性的定量分析。

高分辨质谱分析：利用Q-TOF、Orbitrap等高分辨质谱进行非靶向筛查，准确鉴定未知代谢产物的分子式与结构。

放射性标记示踪法：使用放射性同位素标记的化合物进行孵育，便于追踪其代谢转化路径和物料平衡。

荧光/发光检测法：使用具有荧光或化学发光信号的特定探针底物，适用于高通量筛选和酶活性快速测定。

肝细胞悬浮培养法：将新鲜分离或冻存的原代肝细胞以悬浮状态与化合物共孵育，模拟体内肝细胞代谢环境。

静态与动态孵育系统

静态与动态孵育系统：静态孵育在孔板或试管中进行；动态系统如灌注培养，可更好地维持细胞活性和生理状态。

检测仪器设备

液相色谱-串联质谱仪：进行生物样品中药物及代谢物定性与定量分析的核心设备，具备高灵敏度和特异性。

高分辨质谱仪：如飞行时间或静电场轨道阱质谱，用于测定质量数，推断代谢产物元素组成和结构解析。

恒温振荡培养箱

恒温振荡培养箱：为体外代谢孵育反应提供恒定的温度和环境，并通过振荡确保反应体系均匀混合。

多功能酶标仪：用于读取基于荧光、发光或吸光度变化的快速检测实验数据，适合高通量筛选。

高效液相色谱仪：在连接质谱检测器前，用于复杂生物样品中分析物的色谱分离。

超高效液相色谱仪：采用小粒径色谱柱和更高压力，实现更快速、更高分辨率的分离，常与高分辨质谱联用。

-80°C超低温冰箱

-80°C超低温冰箱：用于长期保存肝微粒体、S9、重组酶、肝细胞及生物样品，保证生物试剂的活性。

液氮储存罐

液氮储存罐

液氮储存罐

液氮储存罐

检测优势

1. 确保安全：通过检测可以确保防爆用呆扳手的安全性，防止在使用过程中引发火灾或爆炸。

2. 提高质量：通过检测可以提高防爆用呆扳手的产品质量，增强其市场竞争力。

3. 延长使用寿命：通过检测可以发现呆扳手的潜在问题，及时进行维修和更换，延长其使用寿命。

4. 降低维护成本：通过定期检测可以及时发现呆扳手的问题，避免因故障导致的停机和维修成本。

5. 提高工作效率：通过检测可以确保呆扳手的正常使用，提高工作效率，减少因工具故障导致的生产损失。