FastDigest Eco57I检测-[北检院]北检(北京)检测技术研究院|第三方科研检测中心

检测项目

FastDigest Eco57I的标准化检测体系包含五个核心验证维度：

酶活性测定：通过单位酶定义（1U=37℃下1小时完全消化1μg λDNA所需酶量）进行定量分析

特异性验证：采用双酶切正交实验确认识别位点5'-CTGAAG(N)16/14-3'的切割准确性

热稳定性测试：评估65℃温育30分钟后的残余活性比率

储存条件评估：监测-20℃保存体系下12个月内的活性衰减曲线

污染物检测：核酸外切酶污染度控制在＜0.1%阈值内

检测范围

本检测方案适用于以下三类样本的质量控制：

重组酶制剂：大肠杆菌表达系统生产的Eco57I纯化产物

工程菌株验证：携带pRRS质粒的BL21(DE3)宿主菌发酵产物

应用体系监测：

基因克隆中的双酶切反应体系（缓冲液兼容性验证）

质粒构建时的星号活性抑制效果评估

DNA分子量标准品的制备质量控制

检测方法

基于ISO 9001:2015质量管理体系建立三级验证流程：

阶段	方法学原理	关键参数
初筛测试	分光光度法测定260nm吸光度变化值	反应时间梯度：5-60min 温度梯度：25-42℃
确认实验	琼脂糖凝胶电泳（0.8%-2.0%浓度梯度）分析切割效率	电压参数：5V/cm 染色剂：GelRed核酸染料
复核验证	Sanger测序法确认酶切位点精确性	测序覆盖率≥99% 读长≥800bp

检测仪器

标准实验室配置需满足以下设备要求：

分光光度系统：

NanoDrop One/OneC微量紫外可见分光光度计（波长范围190-850nm）

BioPhotometer D30核酸浓度测定仪（内置Eco57I活性计算模块）

电泳分析平台：

PowerPac Basic电源系统（输出范围75-300V）

Sub-Cell GT宽幅电泳槽（制胶面积10×10cm）

Gel Doc XR+成像系统（配备520nm滤光片）

温控设备组：

T100 Thermal Cycler PCR仪（温度精度±0.2℃）

C1000 Touch深孔模块（支持96孔板温控反应）

TProfessional TRIO恒温孵育器（温度均一性±0.5℃）

辅助设备组：

Centrifuge 5424 R微量离心机（最大转速13,000rpm）

Vortex-Genie 2涡旋振荡器（转速范围500-3,200rpm）

TwinReader HTS微量板读数仪（支持96/384孔板检测）

注：所有仪器均需通过年度计量校准并保留完整的维护记录文档。

本文件所述方法符合《分子生物学试剂质量规范》（GB/T 34797-2017）第4.3章关于限制性内切酶的检测要求。

　　以上是关于FastDigest Eco57I检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。

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