FastDigest PspFI检测

检测项目

FastDigest PspFI的标准化检测体系包含以下核心项目：

酶活性测定：通过单位时间内的DNA切割效率评估比活性

特异性验证：检验对5'-CCWGG-3'识别位点的精确识别能力

切割效率评估：量化不同反应条件下的DNA消化完全度

热稳定性测试：测定55-65℃温度范围内的功能保持率

储存条件验证：评估长期保存后的酶活恢复率

检测范围

本检测方案适用于以下样本类型及应用场景：

纯化后的PspFI酶制剂（浓度范围0.1-20 U/μL）

含PspFI的预混反应体系（含缓冲液及辅因子）

不同宿主表达系统制备的重组酶产品

基因克隆实验中的DNA模板处理验证

限制性片段长度多态性（RFLP）分析体系

检测方法

基于ISO 17025标准建立的三级验证体系：

分光光度法：采用260nm波长监测双链DNA断裂程度

反应体系：50mM Tris-HCl (pH7.5), 10mM MgCl₂, 100mM NaCl

温育条件：37℃恒温震荡30分钟

琼脂糖凝胶电泳：

1%琼脂糖凝胶（含0.5μg/mL溴化乙锭）

电压参数：5V/cm恒压电泳40分钟

成像系统：紫外透射仪配合CCD成像装置

荧光共振能量转移（FRET）法：

双标记探针：FAM-TAMRA荧光淬灭系统

激发波长：494nm，发射波长：518nm

动态监测时间：0-60分钟（间隔30秒）

高效液相色谱（HPLC）分析：

色谱柱：C18反相柱（4.6×250mm,5μm）

流动相：乙腈-三乙胺醋酸缓冲液梯度洗脱

检测波长：260nm±2nm

实时荧光定量PCR验证：

TaqMan探针法监测切割位点完整性

循环参数：95℃预变性5min后40个循环（95℃15s,60℃1min）

检测仪器

执行检测所需的精密仪器配置清单：

紫外-可见分光光度计： - 波长范围：190-900nm - 分辨率：±0.1nm - 适用于酶活性的快速定量分析

全自动电泳系统： - 电压范围：10-300V可调 - 内置恒温控制模块（4-70℃） - 配套凝胶成像分析软件

荧光微孔板读数仪： - 激发光源：氙灯脉冲系统 - 光学分辨率：1nm步进 - 支持动态反应曲线绘制

高效液相色谱仪： - 四元梯度泵系统 - DAD二极管阵列检测器 - 柱温箱控温精度±0.1℃

实时定量PCR仪： - 多通道荧光检测能力 - 温度均一性≤±0.3℃ - 支持熔解曲线分析功能

恒温混匀仪： - 温度控制范围：4-99℃ - 震荡频率：300-1500rpm可调 - 程序化温控模块

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于FastDigest PspFI检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。