Bsu15I (ClaI)检测-[北检院]北检(北京)检测技术研究院|第三方科研检测中心

检测项目

Bsu15I (ClaI)检测体系包含四大核心参数：

酶活性测定：通过λDNA标准底物切割实验计算单位时间内完成特异性切割的酶量（U/μL），采用分光光度法监测260nm吸光度变化

位点特异性验证：使用含ATCGAT特征序列的pUC19质粒进行双酶切对照实验，琼脂糖凝胶电泳确认片段大小符合预期

纯度分析：SDS-PAGE电泳结合考马斯亮蓝染色法测定杂蛋白含量≤5%，内毒素水平＜0.1EU/μg

稳定性测试-20℃保存条件下进行12个月加速老化实验，活性衰减率需控制在±10%范围内

检测范围

本检测方案适用于以下样本类型：

重组表达系统（大肠杆菌BL21(DE3)）制备的Bsu15I粗提液

经Heparin Sepharose层析纯化的酶制剂（浓度≥10U/μL）

含5'-ATCGAT-3'识别位点的线性/环状DNA底物（浓度50-200ng/μL）

商业化冻干酶产品的复溶液（缓冲体系含10mM Tris-HCl,50mM NaCl,1mM DTT,pH7.5）

检测方法

方法类别	技术要点	判定标准
活性定量法	37℃反应体系中加入1μg λDNA底物,反应终止后计算切割效率≥95%的最小酶量定义为1U	SDS终止液处理后电泳显示完全线性化
特异性验证法	与XhoI、EcoRV等非竞争性内切酶进行组合双酶切,37℃孵育1小时后分析片段数目	琼脂糖凝胶出现预期3条特征条带
SDS-PAGE法	12%分离胶电泳后扫描分析,主带分子量应为34kDa±5%	目标条带占比≥95%(Image Lab软件分析)
HPLC法	C4反相色谱柱(4.6×250mm),流动相梯度洗脱监测215nm吸收峰	主峰保留时间偏差≤0.5min

检测仪器

Nanodrop One微量分光光度计

用于酶液浓度测定及A260/A280纯度比值计算（要求1.7-1.9）

T100 Thermal Cycler PCR仪

提供37℃±0.5℃恒温反应环境,时间控制精度±5秒/小时

Bio-Rad Gel Doc XR+成像系统

完成DNA电泳图谱采集,配合Quantity One软件进行条带灰度分析

Agilent 1260 Infinity II HPLC系统

C4色谱柱实现酶蛋白纯度分析,流动相流速1mL/min,柱温25℃±1℃

Sartorius Cubis II分析天平

称量精度0.01mg,用于配制标准浓度缓冲液及底物溶液

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于Bsu15I (ClaI)检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。

北检研究院

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