FastDigest PsuI检测

检测项目

FastDigest PsuI检测体系包含以下核心验证项目：

酶活性测定：通过单位时间内的底物转化率计算比活性值（U/μL），验证批次间活性一致性

特异性验证：评估对目标识别位点（CTGCAG）的切割效率及非特异性切割发生率

热稳定性测试：在37℃条件下进行时间梯度实验（0-24小时），测定活性衰减曲线

储存稳定性监测：-20℃长期保存条件下定期抽样检测活性保留率

污染物残留分析：包括核酸酶污染检测（灵敏度达0.01%）、内毒素水平测定（LAL法）

缓冲体系兼容性验证：测试在5种标准反应缓冲液中的切割效率差异

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景的质量控制：

生物制药企业生产的重组PsuI酶制剂

分子生物学实验室自备酶制剂的性能验证

诊断试剂盒配套酶的质量验收检测

基因编辑工具开发中的功能验证环节

样本类型涵盖冻干粉剂（浓度范围0.5-10 U/μL）、液体酶制剂（保存于50%甘油体系）

适用基质包括大肠杆菌表达系统产物、体外重组表达产物等

检测方法

标准化的检测流程包含以下技术方法：

分光光度法（UV-Vis）：基于260nm处吸光值变化测定DNA水解速率

反应体系：20mM Tris-HCl (pH7.9), 10mM MgCl₂, 50mM NaCl, 1mM DTT

底物浓度：0.2mg/mL λ-DNA（含12个CTGCAG位点）

琼脂糖凝胶电泳分析：

1%琼脂糖凝胶（含0.5μg/mL溴化乙锭）

电压5V/cm电泳40分钟

切割效率通过DNA条带迁移率差异判定

高效液相色谱（HPLC）：

C18反相色谱柱（4.6×250mm,5μm）

流动相A：0.1% TFA水溶液；B：乙腈/水（90:10）含0.1% TFA

梯度洗脱程序：0-60% B in 30min

荧光定量PCR法：

TaqMan探针法监测非特异性切割事件

探针设计覆盖潜在错切位点（±3bp区域）

检测仪器

标准实验室需配置以下仪器设备：

紫外-可见分光光度计：

波长范围190-900nm

温控比色皿仓（精度±0.1℃）

水平电泳系统：

电源输出范围5-300V

凝胶成像系统（CCD分辨率≥5百万像素）

高效液相色谱仪：

二元梯度泵系统（压力范围0-6000psi）

二极管阵列检测器（波长范围190-900nm）

实时荧光定量PCR仪：

4通道荧光检测能力

温控精度

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于FastDigest PsuI检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。