Pfl23II (BsiWI)检测

检测项目

Pfl23II（BsiWI）检测体系包含以下核心指标：

酶活性测定：通过单位时间DNA底物切割效率评估比活性（U/μL），采用λDNA标准底物在37℃反应体系中进行定量分析

特异性验证：确认仅对CGCG位点（5'→3'）产生特异性切割作用，排除非特异性核酸酶污染

纯度分析：通过SDS-PAGE电泳测定蛋白纯度≥90%，HPLC检测宿主蛋白残留量≤1%

稳定性测试：包括-20℃长期储存稳定性（≥12个月）及反复冻融耐受性（≥5次循环）

抑制剂干扰测试：验证甘油浓度（≤50%）、EDTA（≤1mM）等保存条件对酶活性的影响

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景：

分子克隆实验用酶制剂的质量控制

基因诊断试剂盒核心组分验证

合成生物学元件标准化生产质控

重组蛋白表达系统残留核酸酶检测

不同生产批次间酶活性的可比性验证

样本类型包括但不限于：冻干粉制剂（浓度≥10,000 U/mL）、液体保存酶液（含50%甘油）、预混反应缓冲体系等。

检测方法

采用三级验证体系确保数据可靠性：

分光光度法：基于260nm吸光度变化监测DNA切割进程。建立标准曲线时使用0.8%琼脂糖凝胶电泳验证切割效率与吸光值变化的线性关系（R²≥0.99）

脉冲场电泳分析：采用CHEF Mapper XA系统（Bio-Rad）区分完全消化与部分消化产物，设置参数为6V/cm电场强度、120°交变角度、5-15s脉冲时间梯度

高效液相色谱（HPLC）：使用TSKgel G3000SWxl色谱柱（Tosoh Bioscience），流动相为50mM磷酸钠缓冲液（pH6.8），流速0.5mL/min，214nm波长监测蛋白峰纯度

质谱分析：通过MALDI-TOF MS确认酶分子量（理论值34.5kDa），误差范围±0.1%

终点法测定：在标准反应体系（50mM Tris-HCl,10mM MgCl₂,100mM NaCl,pH7.5@25℃）中孵育1小时，通过0.8%琼脂糖凝胶电泳判定完全消化所需最小酶量

检测仪器

实验设备配置符合GLP规范要求：

紫外分光光度计：Thermo Scientific NanoDrop OneC（波长精度±1nm）

电泳系统：Bio-Rad PowerPac Basic电源+Sub-Cell GT电泳槽（最大电压300V）

凝胶成像仪：Vilber Fusion FX6（CCD分辨率520万像素）配备EvulutionCapt软件

高效液相色谱仪：Agilent 1260 Infinity II系统（四元泵精度±0.15%）

恒温培养箱：Memmert IN75（温度均匀性±0.3℃）带振荡功能模块

微量天平：Sartorius Cubis MSA225S-1CE-DA（分辨率0.01mg）经NIST可溯源砝码校准

所有仪器均执行定期计量校准并保留完整使用日志记录

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于Pfl23II (BsiWI)检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。