FastDigest Eco91I检测

检测项目

FastDigest Eco91I的核心检测体系包含五大关键指标：酶活性单位（U/μL）定量分析、底物DNA识别位点特异性验证、蛋白质纯度（≥90%）测定、热稳定性（37℃条件下活性保持率）测试以及储存条件（-20℃长期保存有效性）验证。其中酶活性检测采用λDNA标准底物进行双盲测试，要求批间差异≤15%。特异性验证需覆盖5种以上不同构型DNA底物（包括超螺旋质粒、线性DNA和PCR产物），切割效率偏差应控制在±5%以内。

检测范围

本检测方案适用于以下样本类型：重组大肠杆菌表达系统生产的Eco91I酶制剂（浓度范围0.5-50 U/μL）、含该酶的预混反应体系（含缓冲液成分）、冻干粉制剂及配套稀释液组合装。应用领域涵盖分子克隆实验验证、基因编辑工具开发、体外诊断试剂盒质控以及生物制药工艺监控等场景。特殊样本包括经化学修饰的酶变体（如甲基化耐受型）需单独建立参照标准。

检测方法

1. 酶活性测定：采用分光光度法（260nm）监测λDNA消化进程，反应体系含1μg底物DNA、1×专用缓冲液及梯度稀释酶液（0.1-10U），37℃孵育30分钟后EDTA终止反应。通过琼脂糖凝胶电泳（0.8%胶浓度）分析消化产物条带强度，计算单位定义（完全消化1μg DNA所需酶量）。

2. 特异性验证：构建含Eco91I识别位点（GCCNNNN↓NGGC）的合成DNA片段（50-500bp），使用毛细管电泳系统（Agilent 2100）分析切割位点准确性。设置阴性对照（非特异序列）和阳性对照（标准质粒），要求非目标位点切割率≤0.1%。

3. 纯度检测：执行SDS-PAGE（12%分离胶）结合密度扫描分析，主要杂质峰面积占比需＜10%。HPLC分子筛层析法（TSKgel G3000SWxl柱）验证单体蛋白比例≥95%，流动相为pH6.8磷酸盐缓冲液（流速0.5mL/min）。

检测仪器

1. 紫外分光光度计（Thermo NanoDrop OneC）：波长范围190-850nm，分辨率≤1nm，用于酶浓度及DNA定量分析
2. 恒温混匀仪（Eppendorf ThermoMixer C）：温控精度±0.5℃，支持96孔板震荡孵育
3. 全自动电泳系统（Bio-Rad ChemiDoc MP）：配备Image Lab软件进行条带灰度分析
4. 高效液相色谱仪（Waters e2695）：配备光电二极管阵列检测器（PDA），波长扫描范围210-400nm
5. 超低温离心机（Beckman Coulter Allegra X-30R）：最大RCF 30,000×g，支持4℃温控运行
6. 微量天平（Mettler Tuledo XPR6）：称量范围0.1μg-2.1g，重复性误差

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于FastDigest Eco91I检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。