BmtI-HF®检测

检测项目

BmtI-HF®检测体系包含以下标准化测试模块：DNA酶活性定量分析（单位：U/μL）、特异性识别位点验证（5'-GDGCHC-3'序列）、非特异性切割概率测定（脱靶效应评估）、温度梯度反应效率测试（20-65℃范围）、抑制剂耐受性实验（SDS/EDTA/乙醇干扰测试）。其中酶活性定量采用λDNA标准底物进行时间梯度消化实验（0-60分钟），通过琼脂糖凝胶电泳结合灰度分析计算单位时间切割效率。

针对临床诊断需求设置补充验证项目：血清样本兼容性测试（含血红蛋白干扰实验）、冻融循环稳定性验证（-80℃至室温循环5次）、长期保存活性监测（4℃储存12个月跟踪测试）。工业级应用需额外完成批次一致性检验（≥3个生产批次平行测试）及大规模反应体系适配性验证（50μL至5mL体积梯度实验）。

检测范围

本检测适用于以下生物样本类型：全血分离基因组DNA（浓度≥50ng/μL）、FFPE组织提取DNA（片段化程度≤30%）、质粒DNA（超螺旋结构占比≥90%）、PCR扩增产物（长度200-5000bp）。特殊样本包括环境DNA提取物（土壤/水体过滤富集样本）及古生物化石DNA降解产物（需预修复处理）。

行业应用覆盖分子诊断试剂盒质控（CE-IVD认证要求）、基因治疗载体构建验证（AAV载体ITR序列完整性检测）、农业转基因成分鉴定（35S启动子/NOS终止子特异性识别）、法医物证DNA分型（STR位点酶切富集）及科研级CRISPR编辑效率评估（sgRNA设计验证）。

检测方法

核心方法采用双盲对照实验设计：阳性对照使用含标准识别位点的pUC19质粒（浓度100ng/μL），阴性对照采用经定点突变的同源质粒。反应体系配置严格遵循NEB缓冲液配方（10×CutSmart Buffer），37℃恒温孵育60分钟后通过1%琼脂糖凝胶电泳（120V,45min）分离酶切产物。

定量分析采用实时荧光定量PCR仪（ABI QuantStudio 5）进行TaqMan探针法绝对定量：设计跨识别位点的双标记探针（FAM/BHQ1），建立标准曲线范围10^1-10^6拷贝/μL。对于超低浓度样本（<10拷贝/μL），需执行数字PCR验证（Bio-Rad QX200系统）以提高检测灵敏度。

检测仪器

主要设备包括：Thermo Fisher NanoDrop One超微量分光光度计（核酸纯度A260/A280比值测定）、Agilent 4200 TapeStation系统（DNA完整性评分）、Eppendorf Mastercycler X50梯度PCR仪（温度敏感性实验）、BioTek Synergy H1多功能酶标仪（微孔板反应动力学监测）。

辅助设备配置：Labconco CentriVap真空浓缩仪（低浓度样本富集处理）、Sartorius Cubis II精密天平（称量精度0.01mg）、Memmert INCOmed培养箱（温度波动±0.1℃）。数据采集使用Beckman Coulter Biomek i7自动化工作站完成96孔板连续加样操作，原始数据经GraphPad Prism 9进行非线性回归分析

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于BmtI-HF®检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。