EGFR-GFP检测

检测项目

EGFR-GFP融合蛋白表达水平分析

通过定量测定转染细胞系或原代细胞中EGFR-GFP融合蛋白的表达丰度，建立标准化的荧光强度-蛋白浓度换算模型。需设置未转染对照组及空载体转染组进行基线校正。

亚细胞定位与动态追踪

监测EGFR-GFP在细胞膜、内体及核周区域的时空分布特征，记录配体刺激后的内吞动力学参数（如半最大内化时间t_1/2），需同步进行温度控制（37℃±0.5℃）和CO₂浓度维持。

突变体功能验证

针对EGFR激酶结构域（ex18-21）的特定突变型GFP融合蛋白进行功能表征，包括二聚化能力、自磷酸化效率及抑制剂敏感性测试。

检测范围

基础研究领域

覆盖上皮细胞、肿瘤细胞系（A549、H1975等）及原代培养细胞的EGFR信号通路研究，适用于EGF/ TGF-α等配体刺激响应分析。

药物研发应用

支持酪氨酸激酶抑制剂（吉非替尼、奥希替尼）的IC₅₀测定、耐药突变筛选及联合用药方案评估。

临床前研究

满足PDX模型移植瘤样本的EGFR活化状态监测需求，可兼容冰冻切片（厚度8-10μm）与活体成像技术。

检测方法

荧光显微成像法

采用60×油浸物镜（NA≥1.4）进行Z轴层扫（步距0.2μm），激发波长488nm/发射波长509nm。图像分析使用Deconvulution算法消除离焦荧光。

流式细胞术定量

设置FSC/SSC阈值排除碎片干扰，采集10,000个以上有效细胞事件。荧光强度校准采用SPHERO™ Rainbow校准微球（8峰型）。

荧光共振能量转移（FRET）

构建EGFR-GFP/抗体-Cy3复合体系（供体-受体间距＜10nm），计算FRET效率评估受体二聚化程度。需进行光漂白校正和光谱交叉补偿。

活细胞动态监测

使用环境控制型培养系统（温度波动＜±0.1℃，湿度＞95%），以30秒间隔连续采集72小时影像数据。运动伪影消除采用非刚性配准算法。

检测仪器

共聚焦显微镜系统

配备GaAsP探测器的激光扫描共聚焦显微镜（如Leica SP8 STED），具备HyD混合探测器（量子效率＞45%）和白激光光源（470-670nm连续可调）。

高通量流式细胞仪

配置405/488/561/640nm四激光系统的分析型流式细胞仪（如BD FACSymphony A5），支持96孔板自动上样和20参数同步检测。

全内反射荧光显微镜（TIRFM）

用于膜表面EGFR-GFP单分子成像的专用系统（如Nikon N-STORM），具备入射角微调装置（精度0.01°）和EMCCD相机（QE＞90%）。

微孔板读板机

整合荧光偏振功能的多功能读板仪（如BMG CLARIOstar），支持光栅单色器（带宽调整范围5-25nm）和双注入式注射器模块

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于EGFR-GFP检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。