北检官网 发布时间:2025-05-12 09:39:19 点击量: 相关: 关键字:BseJI (BsaBI)测试周期,BseJI (BsaBI)测试仪器,BseJI (BsaBI)测试方法
BseJI (BsaBI)检测摘要:BseJI(BsaBI)是一种Ⅱ型限制性内切酶,特异性识别ACCTGC序列并在特定位点切割DNA双链。本文围绕其检测核心要素展开,系统阐述检测项目、适用范围、标准化方法及关键仪器设备,为分子生物学实验质量控制提供技术参考。
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BseJI(BsaBI)检测主要包含以下核心指标:酶活性测定(单位定义:1小时内完全消化1μg λDNA所需酶量)、特异性验证(包括底物识别位点准确性及非特异性切割排除)、纯度分析(通过SDS-PAGE检测杂蛋白含量≤5%)、储存稳定性(-20℃条件下12个月活性衰减≤10%)以及抑制剂耐受性(对常见缓冲液成分的兼容性测试)。
本检测适用于:①基因工程研究中重组质粒的构建验证;②体外诊断试剂盒中限制性内切酶的质控;③合成生物学中DNA元件的标准化处理;④分子克隆实验中酶切效率评估;⑤生物制药领域重组蛋白表达载体的线性化处理验证。
1. 酶活性测定:采用λDNA标准底物法。建立50μL反应体系(含1×CutSmart缓冲液、1μg λDNA),37℃孵育1小时后通过0.8%琼脂糖凝胶电泳判定完全消化所需最小酶量。
2. 特异性验证:使用含ACCTGC位点的合成双链DNA与随机序列对照进行平行实验,通过毛细管电泳分析切割产物长度是否符合预期。
3. 纯度分析:执行SDS-PAGE银染法,使用ImageJ软件计算目标条带占比,配套标准分子量Marker进行校准。
4. 热稳定性测试:将酶制剂分别置于25℃/37℃进行加速老化实验,定期取样测定剩余活性。
1. 核酸电泳系统:Bio-Rad PowerPac Basic电源配合Sub-Cell GT电泳槽,配置Gel Doc XR+成像系统
2. 恒温孵育设备:Eppendorf ThermoMixer C5温控混匀仪(温控精度±0.1℃)
3. 蛋白电泳装置:GE Healthcare Hoefer SE600垂直电泳系统
4. 精密分析仪器:Agilent 2100 Bioanalyzer用于DNA片段精确分析
5. 分光光度计:Thermo NanoDrop One用于酶浓度测定(A280法)
6. 低温离心机:Eppendorf 5424 R(最大转速14,800rpm)用于反应终止处理
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
以上是关于BseJI (BsaBI)检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准,工程师会根据不同产品类型的特点,选取相应的检测项目和方法,以最大程度满足客户的需求和市场的要求。
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