FastDigest RruI检测

检测项目

FastDigest RruI的核心检测体系包含六大关键质量属性验证：1) 酶活性定量测定：通过标准DNA底物切割实验确定单位体积酶制剂的活性单位（U/μL），要求批间差异≤15%；2) 底物特异性验证：采用包含RruI识别位点（CACGGG）及其变体的对照质粒进行切割效率比对；3) 纯度分析：通过SDS-PAGE电泳测定重组蛋白纯度≥95%，核酸残留量≤0.1ng/μg；4) 热稳定性测试：在37℃条件下连续孵育24小时后保持≥90%初始活性；5) 储存条件验证：-20℃保存12个月后活性衰减≤5%；6) 污染物筛查：内毒素水平≤10EU/mg，微生物限度符合USP<61>标准。

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景的质量控制：1) 分子克隆实验中的DNA模板制备；2) 基因分型研究的限制性片段长度多态性分析；3) 重组质粒构建的定向克隆过程；4) DNA测序文库制备的预处理阶段。检测对象包括但不限于大肠杆菌表达系统生产的重组RruI酶制剂、商业化预混反应体系中的酶组分以及实验室自制酶制剂的性能验证。

检测方法

采用三级验证体系确保结果可靠性：一级检测使用分光光度法（λ=280nm）进行蛋白浓度标定；二级验证通过琼脂糖凝胶电泳（1%胶体）分析DNA切割效率；三级确认采用实时荧光定量PCR系统监测非特异性切割事件。具体操作流程包括：

酶活性测定：配制含1μg λDNA的反应体系（50mM Tris-HCl, 10mM MgCl₂, 100mM NaCl, pH7.9@25℃），37℃孵育15分钟后加入EDTA终止反应

特异性验证：设计含5'-CACGGG-3'核心序列及单碱基突变对照的合成DNA片段（长度200bp），通过毛细管电泳分析切割产物条带

热稳定性测试：将酶制剂置于恒温金属浴（精度±0.1℃）中持续孵育，定期取样进行残留活性测定

污染物检测：采用鲎试剂动态浊度法测定内毒素水平，微生物限度测试执行薄膜过滤法（0.22μm滤膜）

检测仪器

实验过程配置专业级分析设备：1) NanoDrop OneC微量分光光度计（Thermo Scientific）用于蛋白浓度快速测定；2) Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪监测非特异性扩增；3) Agilent 4200 TapeStation系统进行DNA片段分析；4) Eppendorf ThermoMixer C5恒温混匀仪控制反应温度；5) Milppore Milp-Q纯水系统提供Type I级实验用水；6) Sartorius Cubis II微量天平（d=0.001mg）精确称量试剂。所有仪器均执行年度计量校准并保留完整的IQ/OQ/PQ文件

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于FastDigest RruI检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。