北检官网 发布时间:2025-05-12 09:46:18 点击量: 相关: 关键字:FastDigest SdaI测试机构,FastDigest SdaI测试标准,FastDigest SdaI测试案例
FastDigest SdaI检测摘要:FastDigest SdaI检测是基于限制性内切酶SdaI的高效酶切特性设计的标准化实验流程,主要用于分子生物学研究中的DNA精准切割分析。检测涵盖酶活性验证、反应条件优化及特异性评估等核心环节,需严格遵循标准化操作规范以确保结果的可重复性与准确性。
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FastDigest SdaI检测的核心项目包括以下四类:
DNA酶切效率验证:通过标准质粒或基因组DNA底物评估SdaI在指定条件下的切割效率。
酶活性单位标定:采用λDNA或超螺旋质粒作为底物测定单位体积内酶的活性(U/μL)。
特异性验证:通过含非特异性位点的对照样本确认酶对5'-C↓TAGAG-3'识别序列的专一性。
稳定性测试:评估不同储存条件(温度、缓冲液成分)对酶活性的长期影响。
本检测适用于以下样本类型及应用场景:
样本类型:纯化后的基因组DNA、质粒DNA、PCR扩增产物及合成寡核苷酸片段。
应用领域:基因克隆载体构建、限制性片段长度多态性(RFLP)分析、基因编辑质粒线性化处理。
浓度要求:DNA样本浓度需≥20 ng/μL且A260/A280比值介于1.7-2.0之间。
特殊限制:含高浓度EDTA(>1 mM)或SDS(>0.01%)的样本需预处理后使用。
标准操作流程分为以下步骤:
样本预处理
将待测DNA样本于65℃孵育10分钟消除二级结构干扰
加入10×FastDigest缓冲液至终浓度1×
酶切反应体系构建
组分 | 体积(μL) | 终浓度 |
---|---|---|
DNA样本 | 1.0 | >20 ng/μL |
10×缓冲液 | 2.0 | 1× |
SdaI酶液 | 1.0 | >5 U/μg DNA |
温育反应程序
37℃恒温反应5-15分钟(依据底物复杂度调整)
80℃加热20分钟终止反应
结果分析
取5 μL产物进行1%琼脂糖凝胶电泳(120V,30min)
通过凝胶成像系统比对标准分子量Marker判断切割效率
实验需配置以下专业设备:
恒温水浴锅/金属浴
温度控制精度±0.5℃,支持37℃与80℃双温区切换。
微量分光光度计
波长范围190-840nm,具备超微量样品台(1-2 μL检测能力)。
电泳系统
包含稳压电源(输出范围50-150V)、水平电泳槽及配套制胶模具。
凝胶成像仪
配备SYBR Safe兼容滤光片组及≥500万像素CCD传感器。
-80℃超低温冰箱
用于长期保存酶制剂及标准参照样本。
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
以上是关于FastDigest SdaI检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准,工程师会根据不同产品类型的特点,选取相应的检测项目和方法,以最大程度满足客户的需求和市场的要求。
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