hCas9检测

检测项目

hCas9蛋白的全面质量评估包含以下核心检测项目：

蛋白纯度测定：通过电泳与色谱技术分析目标蛋白占总蛋白的比例

核酸酶活性验证：定量测定单位时间内对特定DNA底物的切割效率

脱靶效应分析：评估非特异性结合及切割风险的概率与程度

热稳定性测试：在不同温度条件下监测蛋白构象变化与活性衰减

内毒素含量检测：定量测定制备过程中可能引入的细菌内毒素污染

二聚体/多聚体分析：确认蛋白单体的正确折叠与组装状态

检测范围

本检测体系适用于以下应用场景的hCas9质量控制：

基因编辑试剂盒核心组件的批次放行检验

CRISPR-Cas9系统改良型突变体的功能验证

基因治疗载体中核糖核蛋白复合物的活性标定

体外诊断试剂配套酶制剂的性能认证

科研级蛋白产品的标准化质量评价

基因工程细胞系构建过程中的转染效率验证

检测方法

依据ISO 17025标准建立的主要检测方法包括：

SDS-PAGE结合灰度分析：采用12%分离胶体系进行电泳分离后，通过凝胶成像系统计算目标条带占比

高效液相色谱法（HPLC）：使用C4反相色谱柱在214nm波长下进行纯度分析

体外切割实验（ICE assay）：将hCas9与sgRNA复合物作用于荧光标记底物DNA后测定荧光强度变化率

全基因组测序比对法（WGS）：通过NGS技术分析处理组与对照组的基因组变异差异点

差示扫描量热法（DSC）：以1℃/min升温速率记录蛋白熔解温度（Tm值）变化曲线

动态光散射（DLS）技术：测量溶液状态下蛋白粒径分布以判断聚集状态

检测仪器

执行上述检测需配置以下精密分析设备：

高效液相色谱系统（Agilent 1260 Infinity II）：配备多波长紫外检测器及自动进样器模块

实时荧光定量PCR仪（Bio-Rad CFX96）：用于切割产物的定量扩增与熔解曲线分析

微量热泳动仪（NanoTemper Monupth）：实现纳升级样品的分子互作亲和力测定

超灵敏化学发光成像系统（Azure Biosystems C600）：支持Western blot及EMSA实验的精准成像分析

纳米颗粒跟踪分析仪（Malvern NanoSight NS300）：用于亚微米级颗粒的实时动态追踪监测

自动化电泳工作站（ProteinSimple Wes）：完成毛细管电泳与免疫检测的集成化操作流程

所有检测流程均严格遵循ISO/IEC 17025质量管理体系要求执行

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于hCas9检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。