北检官网 发布时间：2025-05-12 09:32:43 点击量： 相关： 关键字：Flag-SIRT1测试案例,Flag-SIRT1测试周期,Flag-SIRT1项目报价
Flag-SIRT1检测摘要：Flag-SIRT1检测是研究SIRT1蛋白功能及其调控机制的重要技术手段。该检测通过特异性识别带有Flag标签的SIRT1融合蛋白，实现对其表达水平、亚细胞定位及活性的定量分析。核心要点包括样本制备标准化、抗体特异性验证及实验条件优化，适用于基础医学研究、疾病机制探索及药物开发等领域。
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Flag-SIRT1检测主要涵盖以下核心项目：
Flag-SIRT1融合蛋白表达水平测定
亚细胞定位与转位动态分析
去乙酰化酶活性定量检测
蛋白-蛋白相互作用验证
翻译后修饰（磷酸化/泛素化）状态分析
应激条件下的稳定性评估
本检测适用于多种生物样本类型：
细胞模型：转染Flag-SIRT1的重组细胞系（HEK293、HeLa等）
原代细胞：经病毒载体导入Flag-SIRT1的神经元、肝细胞等
组织样本：转基因动物模型的组织切片（脑/肝/肾）
体外系统：重组蛋白纯化体系中的酶动力学研究
应用领域包括衰老机制研究、代谢性疾病模型构建、肿瘤微环境分析及神经退行性疾病研究。
标准化的实验流程包含以下关键技术：
Western Blotting：采用抗Flag单克隆抗体（如M2）进行特异性识别
SDS-PAGE电泳条件：12%分离胶，80V恒压转膜
封闭液配方：5%脱脂牛奶/TBST溶液
免疫荧光显微术：
固定剂选择：4%多聚甲醛/PBS（pH7.4）
透膜处理：0.1% Triton X-100作用10分钟
免疫共沉淀（Co-IP）：
裂解缓冲液：含1% NP-40的RIPA缓冲液（补充蛋白酶抑制剂）
抗体偶联：Protein G磁珠4℃孵育4小时
酶活性测定：
荧光底物：Acetylated-p53 peptide（379-382）
反应体系：25mM Tris-Cl (pH8.0), 1mM DTT, 0.5mM NAD+
关键仪器设备及其技术参数：
化学发光成像系统：
动态范围：≥4 orders of magnitude
分辨率：6.5百万像素CCD传感器
共聚焦显微镜系统：
物镜配置：63×油镜（NA1.4）
激光谱线：405/488/561/640nm四线配置
微量热泳动仪（MST）：
温度控制精度：±0.1℃
结合常数测定范围：pM-mM级亲和力
高效液相色谱系统（HPLC）：
C18反相色谱柱（5μm, 4.6×250mm）
流动相梯度：乙腈/0.1% TFA线性梯度洗脱
关键仪器设备及其技术参数：
