AAV-CAGGS-EGFP检测

检测项目

AAV-CAGGS-EGFP检测体系包含以下核心项目：

基因组滴度测定：通过qPCR定量载体中ITR区拷贝数

物理滴度分析：采用ELISA法定量VP1/VP2/VP3衣壳蛋白比例

感染活性滴度验证：基于HEK293T细胞的TCID50终点稀释法

载体纯度检测：SDS-PAGE银染法分析宿主蛋白残留量

EGFP表达效率评估：流式细胞术定量转导细胞荧光强度

空壳率测定：阴离子交换色谱法分离完整/缺陷型颗粒

内毒素水平测试：鲎试剂动态浊度法定量分析

检测范围

本检测方案适用于以下研究场景：

CAGGS启动子调控的AAV载体工程化改造验证

基因治疗研究中报告基因载体的标准化质控

病毒包装工艺优化过程中的质量监控

不同血清型AAV载体（AAV2/5/8/9）的兼容性测试

体外细胞模型（原代神经元、心肌细胞等）转导效率评价

临床前研究中载体批次间一致性验证

冻融循环对病毒稳定性的影响评估

检测方法

采用三级验证体系确保数据可靠性：

基因组定量分析：基于SYBR Green I的实时定量PCR技术，使用ITR特异性引物建立标准曲线（10^2-10^8 copies/μL），设置无模板对照与基因组DNA对照。

衣壳蛋白分析：采用抗AAV VP单克隆抗体包被的ELISA板，通过四参数拟合计算病毒颗粒浓度，灵敏度达1×10^8 vg/mL。

感染活性测定：96孔板梯度稀释法接种HEK293T细胞（MOI=10^3-10^5），72小时后收集细胞进行EGFP荧光显微镜观察与流式计数。

纯度检测体系：4-20%梯度SDS-PAGE电泳后银染显色，使用Image Lab软件分析宿主细胞蛋白条带占比（阈值≤5%）。

功能验证实验：在C2C12成肌细胞中设置MOI梯度（1×10^3-1×10^5），48小时后通过Attune NxT流式细胞仪采集≥10,000个活细胞数据。

稳定性测试：-80℃冻存样本经三次冻融循环后，比较基因组滴度变化率（允许偏差≤15%）。

检测仪器

定量PCR系统：Appped Biosystems QuantStudio 7 Flex实时荧光定量PCR仪（Thermo Fisher Scientific）

蛋白分析平台：Bio-Rad ChemiDoc MP成像系统配合Image Lab 6.0分析软件

流式细胞仪：Thermo Fisher Attune NxT四激光配置系统（405/488/561/640nm）

超速离心设备：Beckman Coulter Optima XPN-100配备Type70Ti转子（最大RCF 504,000×g）

色谱分析系统：Agilent 1260 Infinity II HPLC配备Bio SEC-3色谱柱（300Å, 3μm）

显微成像系统：Olympus IX83倒置荧光显微镜配合CellSens Dimension软件

生物安全设备：ESCO A2型二级生物安全柜与Heracell VIOS 160i CO2培养箱（Thermo Scientific）

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于AAV-CAGGS-EGFP检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。