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FastDigest Eco130I检测

北检官网    发布时间:2025-05-12 09:46:16     点击量:     相关:     关键字:FastDigest Eco130I测试周期,FastDigest Eco130I测试范围,FastDigest Eco130I测试仪器

FastDigest Eco130I检测摘要:FastDigest Eco130I检测是基于限制性内切酶的高效酶切验证技术,适用于基因工程与分子生物学研究中的DNA精准切割分析。核心检测指标包括酶活性效价、特异性识别位点(CCTNAGG)及热稳定性验证,通过标准化实验流程确保酶切效率与批次一致性。  


因业务调整,部分个人测试暂不接受委托,望见谅。

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检测项目

FastDigest Eco130I检测体系包含以下核心验证项目:

    酶切活性定量分析:测定单位时间内对λDNA标准底物的切割效率

    位点特异性验证:通过测序确认CCTNAGG五碱基识别序列的精确切割

    热稳定性测试:评估37-65℃温度梯度下的酶活性保持率

    星号活性监测:在低离子强度(<50mM NaCl)条件下的非特异性切割评估

    储存稳定性验证:-20℃长期保存后的活性衰减率测定

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景:

样本类型适用领域典型基质
质粒DNA基因克隆构建超螺旋/线性化载体
PCR产物限制性片段分析100-10,000bp扩增产物
基因组DNA遗传标记验证哺乳动物/植物基因组
重组蛋白表达系统酶工程优化大肠杆菌表达体系
临床样本分子诊断开发FFPE组织/DBS血样

检测方法

标准操作流程符合ISO 17025体系要求:

    样本制备阶段

      DNA纯度验证:A260/A280比值1.8-2.0合格范围

      浓度标准化:采用Qubit荧光法定量至50ng/μL工作浓度

    酶切反应体系构建

      10×FastDigest缓冲液配制:50mM Tris-HCl (pH7.5@25℃), 100mM NaCl, 10mM MgCl₂, 1mM DTT

      反应条件优化:37℃孵育时间梯度测试(5-60min)

    电泳分析系统验证

      琼脂糖凝胶配置:1%凝胶含0.5μg/mL EB染色剂

      电泳参数设置:5V/cm恒压电泳40分钟

      成像分析标准:GeneRuler 1kb DNA Ladder作为分子量参照物

    数据判读标准

      完全酶切判定:原始条带消失且出现预期大小片段

      部分酶切阈值:未切割DNA残留量≤5%总强度值

检测仪器

关键设备清单及其技术参数:

设备名称型号规格功能用途
紫外分光光度计NanoDrop OneC (Thermo)DNA纯度与浓度初筛
荧光定量仪Qubit 4.0 (Invitrogen)高精度DNA定量分析
恒温混匀仪T100 (Bio-Rad)精确控温酶切反应体系
电泳成像系统Gel Doc XR+ (Bio-Rad)DNA片段可视化分析
超微量天平Sartorius Cubis II MSA6.6S-000-DM缓冲液组分精确称量
梯度PCR仪TProfessional Trio (Biometra)温度敏感性验证实验
-80℃超低温冰箱 Thermo Scientific Forma 900 Series 酶制剂长期保存

注:所有设备均通过年度计量校准并保留完整的IQ/OQ/PQ验证文件。


关键质控节点包括:每批次试剂空白对照设置、标准物质平行样测试(n≥3)、环境温湿度监控(23±2℃, RH≤60%)。异常数据需启动OOS调查程序并执行CAPA纠正措施。


实验废弃物处理严格遵循《实验室生物安全通用要求》(GB19489-2008),含EB污染物按HW49类危险废物进行无害化处置。


本方法参考下列标准建立:
[1]《分子生物学基本技术规程》(WS/T 420-2013)
[2] EN ISO 24276:2017 Foodstuffs - Nucleic acid extraction
[3] CLSI MM19-A2 Vapdation of Mulecular Assays
[4]《限制性内切酶质量标准

北检(北京)检测技术研究院

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

  以上是关于FastDigest Eco130I检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准,工程师会根据不同产品类型的特点,选取相应的检测项目和方法,以最大程度满足客户的需求和市场的要求。

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