北检官网 发布时间:2025-05-12 09:35:14 点击量: 相关: 关键字:AsiSI测试仪器,AsiSI测试周期,AsiSI测试案例
AsiSI检测摘要:AsiSI检测是一种基于限制性内切酶AsiSI的特异性切割活性设计的分子生物学分析方法,主要用于识别基因组DNA中特定双链断裂位点及损伤响应机制研究。该检测需严格控制酶切反应条件、样本纯度及定量标准,通过电泳、测序或荧光标记技术验证切割效率与位点特异性,适用于基础研究、临床诊断及药物开发中的DNA损伤评估。
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AsiSI检测的核心项目包括:
基因组DNA中AsiSI酶特异性识别位点(5'-GCGATCGC-3')的定位分析
双链断裂(DSB)诱导效率的定量测定
DNA损伤响应信号通路激活程度的关联性评估
酶切产物片段大小的分布特征分析
不同细胞周期阶段切割效率的差异性比较
本检测适用于以下研究领域:
基础研究:染色体结构解析、DNA修复机制研究、表观遗传调控分析
临床医学:放疗/化疗引起的DNA损伤评估、癌症易感性筛查
生物技术:基因编辑工具效率验证、合成生物学元件优化
药物开发:DNA损伤修复抑制剂的药效学评价
标准操作流程包含以下关键步骤:
样本制备:采用改良酚-氯仿法提取基因组DNA,浓度≥50ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0
酶切反应体系构建:37℃恒温反应4小时,含10U AsiSI酶/μg DNA及配套缓冲液系统
反应终止与纯化:加入0.5M EDTA终止反应后使用磁珠纯化系统回收产物
产物分析:
琼脂糖凝胶电泳(0.8%凝胶,5V/cm)观察片段分布
qPCR定量特定位点切割效率(引物间距≤200bp)
高通量测序验证切割位点特异性(测序深度≥30×)
数据标准化处理:以λ-DNA作为阳性对照建立标准化切割指数(SCI)计算模型
实验需配置以下专业设备:
恒温培养箱:温度控制精度±0.1℃,配备CO₂浓度调节模块(适用于活细胞实验)
脉冲场电泳系统:可分离10kb-6Mb DNA片段,电场强度梯度调节范围50-200V/cm
实时定量PCR仪:具备高分辨率熔解曲线分析功能(HRM),温度均一性≤0.2℃
超微量分光光度计:检测波长范围190-840nm,最小样本量0.5μL
自动化液体处理工作站:移液精度CV值≤1%,支持96/384孔板操作模式
数字PCR系统:微滴生成效率≥99%,通道间信号偏差≤5%
生物分析仪:可进行DNA完整性评分(DIN≥7.0为合格样本)及精确分子量测定
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
以上是关于AsiSI检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准,工程师会根据不同产品类型的特点,选取相应的检测项目和方法,以最大程度满足客户的需求和市场的要求。
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