BspOI (BmtI)检测-[北检院]北检(北京)检测技术研究院|第三方科研检测中心

检测项目

BspOI（BmtI）检测体系包含以下核心验证指标：酶活性定量测定需通过标准DNA底物切割效率评估；特异性验证需确认其对5'-C↓TAGAG-3'识别序列的专一性；热稳定性测试需在37℃条件下监测酶活维持率；储存稳定性需评估不同保存周期（3/6/12个月）的活性衰减情况；非特异性切割分析需采用超螺旋质粒DNA验证酶解产物纯度。

检测范围

本检测适用于以下样本类型：重组表达纯化的BspOI酶制剂（浓度≥5 U/μL）；含BspOI编码基因的工程菌株冻干粉；体外转录翻译系统产物；商业化的预分装酶制剂（规格≤10 kU）。特殊样本需满足：宿主蛋白残留量＜0.1%、核酸污染＜5 ng/μg、内毒素水平＜0.05 EU/μg。

检测方法

标准酶活测定采用λDNA底物法：建立50 μL反应体系（1×CutSmart Buffer, 1 μg底物DNA），37℃孵育1小时后65℃灭活20分钟。通过0.8%琼脂糖凝胶电泳分析切割效率（100 V, 45 min），使用凝胶成像系统定量未切割条带占比。

特异性验证采用合成双链DNA阵列：包含20种6 bp变异序列及5种甲基化修饰位点。反应条件同标准体系，通过高通量测序确认切割位点精确度（误差率≤0.5%）。

稳定性测试设置加速老化模型：40℃恒温箱储存样品，每周取样进行活性测定（n=3），建立Arrhenius方程预测有效期。

检测仪器

紫外分光光度计（波长260/280 nm）用于酶浓度测定；恒温金属浴（控温精度±0.2℃）保障反应条件稳定；电泳系统需配备高分辨率电源（3000 mA输出）；凝胶成像仪应具备16-bit CCD及≥5 MP分辨率；微量核酸定量仪需支持0.2-100 ng/μL线性范围；HPLC系统（SEC色谱柱）用于纯度分析。

关键参数控制：电泳槽温度维持4±1℃；金属浴孔间温差≤0.3℃；分光光度计比色皿光程校准误差＜0.01 mm；HPLC流动相流速波动范围

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报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

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