6His-MBP-TEV-huLbCpf1检测

检测项目

本检测体系针对6His-MBP-TEV-huLbCpf1重组蛋白建立以下标准化检测项目：

融合蛋白分子量验证：通过质谱分析与理论分子量（72.8 kDa）进行偏差比对

His标签保留率测定：镍柱亲和层析后洗脱组分的金属螯合能力定量分析

TEV蛋白酶切效率评估：切割产物经SDS-PAGE灰度扫描计算切割完成度

MBP标签去除验证：Western Blotting检测麦芽糖结合蛋白特异性条带消失

huLbCpf1核酸酶活性测定：使用双链DNA底物进行体外切割效率定量

内毒素含量检测：鲎试剂法测定每毫克蛋白内毒素单位（EU/mg）

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景的质量控制：

大肠杆菌表达系统制备的6His-MBP-TEV-huLbCpf1重组蛋白批次放行

真核表达系统（如HEK293细胞）产物的工艺优化验证

冷冻干燥制剂复溶后的功能性验证

长期保存样本（-80℃/液氮）的稳定性监测

基因编辑工具开发中的酶活性标准化标定

GMP生产环境下中间产物的过程控制

检测方法

采用三级验证体系确保结果准确性：

一级结构验证

SDS-PAGE电泳：12%分离胶体系运行条件为200V×40min

MALDI-TOF质谱：线性模式采集m/z 50,000-100,000区间数据

纯度分析

反相HPLC：C4色谱柱（4.6×250mm），梯度洗脱0-70%乙腈/0.1%TFA

尺寸排阻色谱：TSKgel G3000SWxl柱（7.8×300mm），流速0.5mL/min

功能活性测试

体外切割实验：20μL反应体系含10mM Tris-HCl(pH7.5)、50mM NaCl、5mM MgCl₂

荧光共振能量转移（FRET）法：双标记DNA底物（FAM/TAMRA）实时监测切割动力学

过程控制指标

BCA法测定蛋白浓度：标准曲线范围0.2-2.0mg/mL

动态光散射（DLS）：测定粒径分布评估聚集状态

检测仪器

实验采用经计量认证的精密分析设备：

电泳系统

Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra电泳槽系统

GE Healthcare ImageQuant LAS4000凝胶成像仪

色谱系统

Agilent 1260 Infinity II HPLC系统（配备DAD检测器）

Waters ACQUITY UPLC H-Class系统（SEC分析专用）

光谱分析设备

Cary 60紫外可见分光光度计（波长精度±0.5nm）

PerkinElmer EnVision多模式读板器（FRET检测）

分子互作分析仪

Malvern Zetasizer Nano ZS动态光散射仪

Bruker ultrafleXtreme MALDI-TOF/TOF质谱仪

环境控制设备

Eppendorf Mastercycler X50 PCR仪（温度控制精度±0.1℃）

Sanyo MCO-20AIC二氧化碳培养箱（温控波动

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于6His-MBP-TEV-huLbCpf1检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。