FastDigest AasI检测

检测项目

FastDigest AasI检测包含以下核心验证指标：酶活性定量测定用于确认单位时间内DNA底物的切割效率；特异性验证通过不同甲基化修饰底物测试酶的识别准确性；热稳定性评估采用梯度温度处理后的残余活性测定；储存稳定性测试涵盖长期保存条件下的性能衰减监测；污染物残留分析包括内毒素、宿主蛋白及核酸杂质的定量检测。

酶活性测定需参照国际单位（U）定义标准：在标准反应体系（50μL）中37℃条件下1小时完全消化1μg λDNA所需的酶量。特异性验证需使用经CpG甲基化处理的对照DNA进行平行实验。热稳定性测试设定温度梯度为45℃-65℃，时间梯度为15-60分钟。

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景：生物制药生产过程中重组AasI酶的批次放行检验；分子生物学实验室对商品化快速消化酶的效能验证；诊断试剂开发中限制性内切酶的功能质控；第三方检测机构对酶制剂的合规性认证。

具体涵盖样本类型包括但不限于：冻干酶制剂、甘油储存酶溶液、预混反应缓冲体系以及固定化酶载体。对于临床级酶制品需额外执行USP<85>微生物限度测试与ICH Q6B生物制品标准验证。

检测方法

1. 分光光度法：采用260nm波长监测DNA底物超螺旋结构向线性结构的转变速率。建立标准曲线时需使用经琼脂糖凝胶电泳验证的系列浓度线性DNA对照品。

2. 凝胶电泳分析：1%琼脂糖凝胶电泳（5V/cm）分离酶切产物，通过成像系统定量闭环DNA与线性DNA的比率。需设置未处理DNA对照与完全消化阳性对照。

3. 高效液相色谱（HPLC）：采用阴离子交换色谱柱（如DNAPac PA200）分离不同构型DNA片段，流动相梯度为0.5-1.5M NaCl（pH 8.0），流速1mL/min。

4. 荧光定量PCR：针对特定限制性位点设计探针体系，通过Ct值变化反映酶切效率。该方法适用于微量样本（<10ng DNA）的高通量检测。

检测仪器

1. 紫外-可见分光光度计：配备恒温比色皿支架（精度±0.1℃），用于实时监测酶促反应动力学过程。

2. 全自动电泳系统：集成凝胶成像与分析模块（分辨率≥5M像素），支持SYBR Guld染色的荧光定量检测模式。

3. 超高效液相色谱仪：配置自动进样器与二极管阵列检测器（190-800nm波长范围），柱温箱控温范围4-80℃。

4. 实时荧光定量PCR仪：具备快速升降温功能（≥4℃/s），支持多通道荧光同步采集。

5. 微量热分析仪：采用差示扫描量热法（DSC）测定酶的熔解温度（Tm值），升温速率设定为

北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于FastDigest AasI检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。