pRE112检测

检测项目

pRE112载体检测体系包含以下核心验证指标：

质粒分子量验证：通过限制性内切酶图谱分析确认载体大小符合理论值（4,786bp）

复制起点功能测试：评估CulE1复制子在宿主细胞中的拷贝数稳定性

氯霉素抗性基因（CAT）表达验证：测定最小抑制浓度（MIC）达到30μg/mL的耐药阈值

多克隆位点完整性检验：确认BamHI/EcoRI/XbaI等酶切位点的可操作性

接合转移元件检测：验证oriT区域对细菌接合作用的响应能力

温度敏感型复制控制：测试30℃与37℃条件下的质粒维持特性

检测范围

本检测方案适用于以下应用场景的质量控制：

分子克隆构建验证：确认外源DNA片段（≤8kb）的正确插入与方向性

细菌-植物跨域转移系统验证：测试三亲本接合体系的转移效率（≥1×10^-3/供体细胞）

农杆菌介导转化实验：评估Ti辅助质粒的兼容性及vir基因诱导效率

植物瞬时表达系统：测定GUS报告基因在烟草叶片中的表达强度

质粒稳定性研究：连续传代30次后保持＞95%的质粒保有率

生物安全评估：验证温度敏感型复制控制系统的有效性

检测方法

标准操作流程包含以下关键技术环节：

脉冲场凝胶电泳（PFGE）：采用1%琼脂糖凝胶在6V/cm条件下运行18小时，精确分离超螺旋DNA构型

Southern杂交分析：使用地高辛标记的CAT探针进行膜转移杂交验证

定量竞争PCR（QC-PCR）：建立10²-10⁷拷贝数的标准曲线进行绝对定量

微量稀释法药敏试验：在LB培养基中梯度稀释氯霉素测定MIC值

接合转移效率测定：采用滤膜法在三亲本系统中计算转接合子形成率

热诱导实验：42℃处理30分钟评估质粒丢失率与细胞存活率相关性

检测仪器

标准实验室需配置以下专业设备：

CHEF-DRⅢ型脉冲场电泳系统：配备角度转换装置和冷却循环泵组

Typhoon FLA9500多功能成像仪：支持化学发光与荧光双模式检测

QuantStudio 6 Flex实时定量PCR仪：配置TaqMan探针模块

Eppendorf恒温摇床：精度±0.2℃的温度控制系统

Bio-Rad Gene Pulser Xcell电转化仪：预设大肠杆菌转化程序（1.8kV, 600Ω, 25μF）

NanoDrop One超微量分光光度计：具备dsDNA高灵敏度检测模式（检测限0.2ng/μL）

Forma Scientific厌氧培养箱：维持5% CO₂环境进行植物共培养实验

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北检(北京)检测技术研究院

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是关于pRE112检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准，工程师会根据不同产品类型的特点，选取相应的检测项目和方法，以最大程度满足客户的需求和市场的要求。