北检官网 发布时间:2025-05-12 09:41:04 点击量: 相关: 关键字:10bp ladder测试方法,10bp ladder测试周期,10bp ladder测试案例
10bp ladder检测摘要:10bp ladder是分子生物学实验中常用的DNA分子量标准品,主要用于核酸电泳分析中的片段长度精确校准。本文从检测项目、范围、方法及仪器四个维度系统阐述其质量控制要点,重点涵盖片段长度准确性验证、浓度与纯度测定、批次一致性评估等核心指标,为实验室标准化操作提供技术依据。
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10bp ladder的质控体系包含四大核心检测模块:
片段长度准确性验证:通过高分辨率电泳系统确认各条带迁移率与标称值偏差≤±5%,重点验证100bp以下小片段的分离精度
浓度定量分析:采用紫外分光光度法与荧光定量法双重验证总DNA浓度,要求批内变异系数(CV)<3%
纯度测定:评估A260/A280比值(1.80-1.90)及A260/A230比值(>2.0),排除蛋白质污染及有机溶剂残留
批次一致性测试:通过数字化凝胶成像系统进行条带强度比对分析,确保不同生产批次间各条带相对丰度差异<15%
应用场景 | 检测参数 | 执行标准 |
---|---|---|
琼脂糖凝胶电泳(0.8%-3%) | 条带分辨率/拖尾现象 | ISO/IEC 17025:2017 |
聚丙烯酰胺凝胶电泳(8%-15%) | 小片段分离效果 | DIN EN ISO 9001:2015 |
实时荧光定量PCR | 引物二聚体干扰测试 | CLSI EP05-A3 |
下一代测序建库 | 接头连接效率验证 | Illumina Technical Note |
琼脂糖凝胶电泳法
配制1×TAE缓冲液的2%琼脂糖凝胶(含0.5μg/mL EB)
上样量控制:5μL ladder+1μL loading buffer
电泳条件:120V恒压运行40分钟
使用校准过的成像系统采集数据并分析条带迁移距离
毛细管电泳法
采用Agilent 2100 Bioanalyzer系统进行高灵敏度检测
使用DNA 1000芯片进行上样分析
设置峰高阈值>50RFU进行自动积分计算
通过内部标准品进行迁移时间校正
数字PCR绝对定量法
采用微滴式数字PCR系统进行单分子计数
设计特异性探针区分目标片段与非特异性产物
每个样本设置≥3个技术重复
根据泊松分布计算拷贝数浓度
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
以上是关于10bp ladder检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、方法和步骤以与工程师沟通为准。北检研究院将持续跟进新的技术和标准,工程师会根据不同产品类型的特点,选取相应的检测项目和方法,以最大程度满足客户的需求和市场的要求。
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